Avaliação do silenciamento de SRPK por CRISPR/Cas9 e da interação com EFHD2 em melanoma metastático murino

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Caetano, Mônica Maria Magalhães
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; Bioquímica Aplicada
• Palavras-chave em Português: Proteinas quinases; Melanona; Metastase; Biologia Molecular
• Link de acesso: https://locus.ufv.br//handle/123456789/30937

As proteínas cinases serina/arginina (SRPK) são classicamente relacionadas à regulação do splicing do pré-mRNA pela fosforilação de fatores de splicing ricos em dipeptídeos serina e arginina, as proteínas SR. É evidente a importância de estudos que visem elucidar os mecanismos moleculares da atuação das SRPK em diversas vias de sinalização, splicing do pré-mRNA e outros processos celulares, sobretudo relacionados ao desenvolvimento do câncer e formação de metástase, nos quais essas cinases já foram identificadas superexpressas. Neste trabalho, avaliamos o impacto do silenciamento de SRPK em melanoma metastático murino. O silenciamento de SRPK2 na linhagem celular de melanoma, B16F10, prejudicou o desenvolvimento do tumor subcutâneo e a formação de nódulos pulmonares in vivo e diminuiu a proliferação e a invasão celular in vitro. A supressão da expressão de SRPK1 e SRPK2, simultaneamente, diminuiu a capacidade de formação de colônias de B16F10. O mecanismo de ação de SRPK2 no desenvolvimento do melanoma parece estar relacionado à sua atuação na dinâmica de polimerização do citoesqueleto de Actina, pois o silenciamento de SRPK2 diminuiu a formação de F-actina nas células B16F10. Um ensaio de duplo-híbrido em leveduras, realizado anteriormente pelo nosso grupo de pesquisa, mostrou a possível interação entre a região espaçadora de SRPK2 e proteínas relacionadas à regulação do citoesqueleto de Actina. Dentre elas, EFhd2 está envolvida na regulação da dinâmica de polimerização do citoesqueleto de actina e formação de metástase em melanoma. Neste trabalho a interação entre SRPK2 e EFhd2 foi confirmada pelos ensaios de co-imunoprecipitação e GST-pulldown. Ensaios de fosforilação in vitro mostraram que EFhd2 pode ser fosforilada por SRPK2. Portanto, com os resultados obtidos até o momento, é possível sugerir que a diminuição da capacidade metastática de B16F10 em decorrência da supressão da expressão de SRPK2 pode envolver, pelo menos parcialmente, alterações na dinâmica do citoesqueleto de Actina via EFhd2. Esses dados criam novas perspectivas sobre o entendimento da relação funcional entre SRPK2 e a dinâmica do citoesqueleto de Actina no contexto do melanoma metastático e potencialmente em outros tipos de tumores. Palavras-chave: Serine/arginine protein kinase. Melanoma. Metástase.