Estudo dos polimorfismos no gene da NTPDase 2 da cepa ET de Leishmania (Viannia) braziliensis

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Valiate, Bruno Vinicius Santos
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Bioquímica e Biologia molecular de plantas; Bioquímica e Biologia molecular animal; Mestrado em Bioquímica Agrícola; UFV
• Palavras-chave em Português: Polimorfismo; NTPDase 2; Leishmania; Polymorphisms; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2454

As Leishmanioses são doenças negligenciadas de países subtropicais. Causada por protozoário do gênero Leishmania, que são transmitidos por flebotomíneos. As Leishmanioses consistem basicamente de duas formas, cutânea e visceral. Na superfície dos parasitos deste gênero há proteínas denominadas ecto-nucleotidades (apirases). Apirases são enzimas que hidrolisam nucleosídeos tri e di-fosfatados. Em Leishmania braziliensis há dois genes de apirase mapeados, NTPDase-1 e 2. Há diversos trabalhos que relacionam a atividade destas enzimas com processos como virulência, infecção, captação de nutrientes e adesão celular. Dados não publicados de RNA seq revelaram que na sequência mensageira das NTPDases existem polimorfismos de base única (SNPs). SNPs podem influenciar a função de um gene através de mudança de uma base de um códon, podendo gerar uma mudança de aminoácido. Este trabalho objetivou a análise dos SNPs da NTPDase-2 da cepa ET de L. b. Na primeira parte do trabalho o DNA genômico foi extraído para que pudesse ser usado como molde para isolamento do gene da NTPDase-2 por PCR. O gene isolado foi ligado no vetor pJET para posterior sequenciamento. Na segunda parte, foram isolados clones dos parasitos cultivados através de diluição limitante. Após o isolamento de 5 clones, foram feitos os mesmos procedimentos da primeira parte para que a NTPDase-2 de cada clone pudesse ser sequenciada. Com os clones foi feita uma curva de crescimento e medida da atividade ecto-nucleotidásica. O sequenciamento mostrou que há 2 SNPs que não mudam o códon em todas as colônias isoladas pra sequenciamento, tanto na primeira quanto na segunda parte. Dos 5 clones, dois tiveram um crescimento menor que os demais. Na comparação das atividades nucleotidásicas foi observado que os clones que mais cresceram tiveram maior atividade, confirmando resultados de outros trabalhos que relacionam proliferação dos parasitos com atividade ecto-nucleotidásica. Entretando um dos clones apresentou alta atividade sem que tenha se observado alta proliferação. Os resultados confirmaram parcialmente esta relação e estudos posteriores visam completar e melhor explicar os resultados observados.