Circovírus suino tipo 2 (PCV2): caracterização molecular e construção de vetores para expressão da proteína do capsídeo

• Ano de defesa: 2005
• Autor(a) principal: Silva Júnior, Abelardo
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa; BR; Bioquímica e Biologia molecular de plantas; Bioquímica e Biologia molecular animal; Mestrado em Bioquímica Agrícola; UFV
• Palavras-chave em Português: Circovírus suino; Vacinas recombinantes; Análise molecular; Porcine circovirus; Recombinant vaccines; Molecular analysis; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
• Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/2395

O genoma do PCV apresenta aproximadamente 1.760 pb, composto de uma molécula de DNA fita simples, circular e de duas principais fases de leitura aberta (ORFs): ORF1 que codifica a replicase viral e ORF2 que codifica a proteína da cápside viral. O objetivo deste trabalho foi realizar a caracterização molecular de um isolado de PCV2 e produzir um vetor de expressão contendo a seqüência do capsídeo viral. O DNA de PCV2, extraído de células SK6 infectadas, foi amplificado por PCR e, em seguida, confirmado por seqüenciamento. Após a confirmação do isolamento, todo o genoma viral foi amplificado por PCR, inserido em um vetor de clonagem, e o clone recombinante foi submetido a reações de seqüenciamento. Foram realizados ensaios de PCR que amplificavam o segmento gênico do capsídeo viral e o produto de amplificação foi inserido em um vetor de expressão. Este DNA plasmidial foi transfectado em células SK6 livres de PCV. A expressão da proteína viral foi confirmada por imunofluorescência indireta. A análise da seqüência completa de nucleotídeos da ORF1 e parcial ORF2 do clone contendo todo genoma viral mostrou respectivamente, 99,27% e 97,99% de identidade com as demais seqüências disponíveis no GenBank. Atualmente, não há nenhum método vacinal disponível no mercado para o controle da circovirose suína. Os resultados obtidos neste trabalho serão de grande importância para o início de estudos de vacinações em modelos animais.