Desenho racional e expressão de anticorpos scFv como ferramenta biotecnológica no diagnóstico da COVID-19
| Ano de defesa: | 2021 |
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| Autor(a) principal: | |
| Orientador(a): | |
| Banca de defesa: | |
| Tipo de documento: | Dissertação |
| Tipo de acesso: | Acesso aberto |
| Idioma: | por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal de Viçosa
Bioquímica Aplicada |
| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Palavras-chave em Português: | |
| Link de acesso: | https://locus.ufv.br//handle/123456789/29607 https://doi.org/10.47328/ufvbbt.2022.046 |
Resumo: | A COVID-19 é uma doença altamente contagiosa causada pelo novo coronavirus SARS-CoV- 2 e declarada pandêmica pela Organização Mundial da Saúde no dia 11 de março de 2020. Os sintomas da doença variam deste um resfriado até falência múltipla de órgãos, culminado na morte do panciente. O diagnóstico confirmatório da doença é realizada pelo método da RT - PCR. Entretanto, as limitações atribuídas a técnica se fez necessário o desenvolvimento de novos métodos para auxiliar no rastreio da doença, os quais não apresentam sensibilidade e especificidade satisfatórias. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi desenvolver um anticorpo scFv engenheirado direcionado a um epítopo localizado na proteína spike presente na membrana do vírus utilizando ferramentas de biofísica computacional e produzir a proteína recombinante por expressão heteróloga em E. coli para ser aplicada no desenvolvimento um novo teste diagnóstico acurado, de manuseio fácil e de ampla distribuição para auxiliar no combate da COVID-19. O capítulo 1 deste trabalho apresenta toda a metodologia utilizada para desenhar o anticorpo scFv otimizado, o qual foi produzido a partir de métodos como a modelagem computacional, mutações sítio-dirigidas e simulações de dinâmica molecular. O capítulo 2 demonstra todos os processos realizados no desenho e obtenção do gene sintético, padronização da expressão e purificação dos anticorpos scFv recombinantes e os testes de estabilidade das proteínas. A combinação de métodos in silico e in vitro se mostra promissor no desenvolvimento de novos produtos biotenológicos, em menor tempo de produção e também menor custo do produto final, sendo de suma importância em cenários emergenciais como a pandemia da COVID-19. Palavras-chave: ScFv anti-Spike do SARS-CoV-2. Fragmento de cadeia única Fv de anticorpo anti-Spike do SARS-CoV-2. Anticorpo anti-Spike do SARS-CoV-2. Diagnótico de COVID- 19. Anticorpo monoclonal anti-SARS-CoV-2. |