Determinação do perfil lipidômico de soro humano para rastreamentode potenciais biomarcadores de carcinoma hepatocelular associado às hepatites virais

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Passos-Castilho, Ana Maria [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Lipídios; Marcadores biológicos; Carcinoma hepato celular; Hepatite viral humana; Espectrometria de massas
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2550552; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47193

Introdução: A lipidômica é a ciência que visa identificar e quantificar o perfil global ou parcial de lipídios presentes em um sistema biológico em um determinado tempo. O carcinoma hepatocelular é o sexto câncer mais comum em todo o mundo e as hepatites crônicas B e C representam a sua principal causa. Biomarcadores para o diagnóstico do carcinoma hepatocelular ainda são escassos. Objetivos: Avaliar a aplicabilidade da lipidômica como ferramenta para rastreamento de biomarcadores de carcinoma hepatocelular, desenvolver e padronizar um método de lipidômica eficaz para detecção global e quantificação relativa de lipídios em amostras de sangue periférico humano, e determinar o perfil lipidômico de soro humano no carcinoma hepatocelular associado às hepatites virais B e C para rastrear biomarcadores com potencial diagnóstico. Métodos: Primeiramente realizou-se um estudo piloto em que o perfil lipidômico de 25 pacientes com carcinoma hepatocelular associado à hepatite C obtido por espectrometria de massas por dessorção/ionização a laser assistida por matriz foi comparado ao de 15 pacientes com cirrose hepática e 25 pacientes com hepatite crônica. Em seguida, desenvolveu-se e padronizou-se um método de lipidômica utilizando cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas por ionização por spray de elétrons. A seguir, realizou-se um estudo de aplicação do método padronizado com pacientes com hepatite B crônica em que foram incluídos 32 pacientes com carcinoma hepatocelular, 30 com cirrose hepática, 25 com hepatite B crônica e 34 controles saudáveis. Por fim, realizou-se um estudo de aplicação do método padronizado em pacientes com hepatite C crônica, com 56 pacientes com carcinoma hepatocelular, 59 com cirrose hepática, 62 com hepatite C xx crônica e 58 controles saudáveis. Candidatos a potenciais biomarcadores foram selecionados por análise estatística e curvas de característica de operação do receptor foram geradas para comparar a acurácia dos biomarcadores selecionados e níveis de alfafetoproteína no diagnóstico do carcinoma hepatocelular. As bases The Human Metabolome Database e The LIPID MAPS Lipidomics Gateway foram pesquisadas para a identificação dos candidatos por meio de sua relação massa/carga. Resultados: O estudo-piloto inicial resultou em um algoritmo de 7 picos que foi capaz de distinguir carcinoma hepatocelular de cirrose hepática com sensibilidade de 96% e especificidade de 87%. Em seguida, o método desenvolvido de cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas por ionização por spray de elétrons apresentou boa performance na separação de diferentes grupos estudados e na detecção de diferentes espécies de lipídios de várias ordens de grandeza. A seguir, o perfil lipidômico distinguiu os pacientes com câncer e forneceu um diagnóstico mais preciso para os pacientes com cirrose hepática que a detecção convencional de alfafetoproteína. Foi possível distinguir carcinoma hepatocelular associado à hepatite B com sensibilidade de 78% e especificidade de 64%. Por fim, pôde-se distinguir carcinoma hepatocelular associado à hepatite C de cirrose hepática com 100% de sensibilidade e especificidade utilizando 13 candidatos, incluindo a PC(32:1). Conclusões: O presente estudo confirmou a possibilidade de aplicação de um método lipidômico por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas para a distinção entre carcinoma hepatocelular e cirrose hepática e identificou a PC(32:1) como um potencial novo biomarcador eficaz para a detecção precoce do carcinoma hepatocelular associado à hepatite C crônica.