Efeitos de peptídeos relacionados ao inibidor quimérico recombinante de Bauhinia bauhinioides, rBbKIm, e à lectina da casca de Crataeva tapia, CrataBL, no modelo de melanoma

• Ano de defesa: 2023
• Autor(a) principal: Lie, Kathleen Chwen Ming [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Câncer; Lectina; Melanoma; Peptídeos; Inibidor de proteases
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/67261

Entre os tipos de câncer de pele, o melanoma representa cerca de 3% dos tumores cutâneos. Não é um dos tumores mais comuns, mas é um dos mais agressivos e, na ausência de tratamento eficaz, é necessário buscar novos medicamentos. No câncer em geral, a metástase é facilitada pelas proteases das células tumorais. Os inibidores de proteases, particularmente aqueles encontrados em leguminosas, são candidatos potenciais para controlar esses eventos, bloqueando a progressão do câncer. Uma forma quimérica do inibidor de calicreína denominado rBbKIm (Bauhinia bauhinioides Kallikrein inhibitor modified) foi clonada, a estrutura básica é a do inibidor encontrado em B. bauhinioides, mas inclui as sequências EPVARGDG e DRGE de BrTI (Bauhinia rufa trypsin inhibitor). Foi relatado um efeito deletério desta proteína sobre as linhagens de células tumorais da próstata DU145 e PC3. Outra proteína, CrataBL (Crataeva tapia Bark Lectin), que assim como uma lectina, é específica para oligossacarídeos presentes em proteínas glicosiladas superexpressas no microambiente tumoral, o que é importante para o crescimento tumoral. Objetivos: Estudar os efeitos de rBbKIm, CrataBL e peptídeos derivados de suas estruturas em células de melanoma. Materiais e Métodos: as células (SK-MEL-28) foram tratadas com rBbKIm, CrataBL ou peptídeos e avaliadas viabilidade, proliferação, adesão, migração, invasão, morte e ciclo celular, fragmentação celular, expressão de proteínas celulares, produção de óxido nítrico e citocinas. Resultados: Embora rBbKIm tenha sido capaz de inibir as calicreínas teciduais KLK 6 e 7, serino proteases que desempenham um papel importante no desenvolvimento do melanoma, a proteína e os peptídeos derivados da sequência de rBbKIm não interferiram na viabilidade e proliferação da SK-MEL-28, enquanto a CrataBL (100 e 200 µM) reduziu a viabilidade celular em mais de 60%. CrataBL foi resistente à proteólise, pois seu efeito na proliferação de SK-MEL-28 também foi observado após 72 h de tratamento (inibição superior a 90%). Além disso, 100 µM de proteína inibiu em mais de 80% da migração celular, mais de 100% da invasão celular, pode reduzir o nível de expressão da interleucina 6, diminuiu a capacidade das células SK-MEL-28 de aderir à laminina e induziu apoptose tardia em 48 h; além disso, foi possível observar uma diminuição nas proteínas pFAK e NF-kB 50 kDa. Embora o peptídeo derivado de sua estrutura (Pep. 27) não tenha sido eficaz em inibir a viabilidade, proliferação e invasão, ele impediu mais de 80% da migração celular em 24 e 48 h, causou uma diminuição na liberação de óxido nítrico e reduziu o número de células viáveis em 24 h. O tratamento combinado de Pep. 27 com o vemurafenibe causou aumento da apoptose precoce após 48 h. O Pep. 26, por outro lado, diminuiu a migração celular em 60%, foi capaz de reduzir a liberação de óxido nítrico, citocina PDGF-AB/BB, adesão celular ao colágeno IV e induziu apoptose precoce e tardia em até 24 h de tratamento. E embora o tratamento combinado não tenha mostrado nenhum efeito significativo em alguns eventos celulares estudados, o tratamento isolado com vemurafenibe causou diminuição da interleucina 8 e potencializou os efeitos da proteína e dos peptídeos em reduzir a liberação dessa interleucina. Conclusão: Os dados mostraram a especificidade da ação dos inibidores de proteases no bloqueio de células do melanoma, e a CrataBL bem como os peptídeos derivados de sua estrutura mostraram efeitos antitumorais importantes que devem continuar a serem investigados.