Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2007 |
| Autor(a) principal: |
Pires, Fabiano Araujo
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| Orientador(a): |
Moya Borja, Gonzalo Efrain
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| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Tese
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias
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| Departamento: |
Instituto de Veterinária
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9635
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Resumo: |
Neste trabalho foram realizados ensaios de atividade de proteinase em solução e com proteínas imobilizadas em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio copolimerizado com gelatina, para detecção e quantificação das proteinases presentes nos extratos larvares de segundo (L2) e terceiro (L3) estágios de Dermatobia hominis. Nos ensaios quantitativos, utilizou-se um painel de peptídeos sintéticos específicos para as principais classes de proteinases. Verificamos que o substrato pGlu-Phe-Leu p-nitroanilide foi hidrolisado pelo extrato total de L2 (3,0 ± 0,2 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (7,7 ± 0,1 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e que ambas atividades foram parcialmente inibidas pelo trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)butane, 15 % e 3 % respectivamente. Também, demonstramos que o substrato Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester foi hidrolisado pelos extratos totais de L2 (117 ± 24 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (111 ± 10 nmoles hora-1 mg de proteina-1), sugerindo uma predominância da atividade esterásica nestes extratos. A atividade específica de serino-proteinases foi totalmente inibida pelo phenylmethylsulphonyl fluoride nos extratos de L3, enquanto que somente 10 % desta atividade foi inibida nos extrados de L2. Além disso, nós detectamos que o extrato total das larvas L2 (Km = 7,59) tem maior afinidade ao Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester do que o extrato total das larva de L3 (Km = 35,75). Os resultados do ensaio qualitativo com géis de substrato sugerem que os extratos larvares L2 e L3 expressam serino-proteinases com similares (13 kDa e 22 kDa) e distintas (50 kDa em L2 e 30 kDa em L3) massas moleculares relativas. Adicionalmente, isolamos uma atividade esterásica enriquecida do extrato total de L3 utilizando sucessivas cromatografias em colunas de Aprotinina-Agarose e DEAE-Sephacell. Com esta estratégia, detectamos somente uma banda de proteinase de 50 kDa neste extrato total. Estes resultados contribuem para a caracterização das proteinases larvares de D. hominis. |
