Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2016 |
| Autor(a) principal: |
Sidoni, Marli
 |
| Orientador(a): |
Danelli, Maria das Graças Miranda |
| Banca de defesa: |
Danelli, Maria das Graças Miranda,
Mazur, Carlos,
Silva Junior, Jose Godinho da,
Pinto, Marcelo Alves,
Silva, Valmir Laurentino |
| Tipo de documento: |
Tese
|
| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
|
| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Ciência, Tecnologia e Inovação em Agropecuária
|
| Departamento: |
Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós-Graduação
|
| País: |
Brasil
|
| Palavras-chave em Português: |
|
| Palavras-chave em Inglês: |
|
| Área do conhecimento CNPq: |
|
| Link de acesso: |
https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9810
|
Resumo: |
O objetivo deste trabalho foi aplicar a tecnologia IgY no desenvolvimento de um teste imunoenzimático, ELISA, para o diagnóstico do FIV, contribuindo no estabelecimento de um modelo de produção para um kit nacional na área de medicina veterinária. A primeira etapa do desenvolvimento deste trabalho consistiu na revisão da literatura dos documentos próprios para produtos de uso veterinário, destinados a diagnosticar doenças dos animais, disponibilizados na legislação vigente. A consulta aos documentos nacionais e internacionais potencializou o esclarecimento de parâmetros de desempenho ou critérios de validação de métodos, para o desenvolvimento deste novo produto, denominado ELISA r-p24 IgY. A segunda etapa consistiu no estabelecimento da produção, purificação e caracterização físico-química da proteína recombinante p24 do FIV. A preservação da atividade biológica foi demonstrada por Western Blot com a presença de uma banda peptídica de aproximadamente 25 kDa, referente à proteína r-p24. A terceira etapa deste trabalho, consistiu na obtenção de anticorpos IgY anti-IgG de gato, a partir da inoculação em galinhas poedeiras. A cinética foi acompanhada por ELISA demonstrando um aumento gradativo do título de anticorpos na gema a partir da segunda semana, com um aumento significativo no 2° mês, e mantendo-se elevado durante todo o período de cinco meses. As concentrações médias de proteínas na galinha 1 foi de 40,1 mg/mL a partir de uma gema e na galinha 2 foi de 32,2 mg/mL por gema, no período de 5 meses. A quarta etapa deste trabalho consistiu no emprego da tecnologia IgY para o desenvolvimento, padronização e a validação do teste de Elisa r-p24 IgY para o diagnóstico da infecção causada pelo FIV. Os resultados obtidos foram: a acurácia de 99%, a sensibilidade de 97,7%, a especificidade de 99,5%, e o índice kappa de 99,1%. Na quinta etapa deste trabalho realizou-se o estudo comparativo do ELISA r-p24 IgY frente ao ELISA r-p24 IgG, e foi demonstrado o desempenho superior no ELISA r-p24 IgY. A validação do ELISA r-p24 IgY mostrou características desejáveis para o uso comercial, tais como alta precisão e manutenção da reatividade por um período mínimo de 12 meses. Conclui-se que o procedimento elaborado foi eficiente e possibilitou o desenvolvimento de um teste para o diagnóstico do FIV. O domínio da Tecnologia IgY poderá contribuir com a pesquisa e o desenvolvimento de novos ensaios atendendo às normas e diretrizes nacionais e internacionais, tanto de bem-estar animal como de validação, impulsionando o desenvolvimento nacional de kits diagnósticos de interesse em saúde humana ou animal. |
