Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2018 |
| Autor(a) principal: |
Oliveira Filho, Marcos Antonio |
| Orientador(a): |
Santos, Everaldo Silvino dos |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Não Informado pela instituição
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| Programa de Pós-Graduação: |
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ENGENHARIA QUÍMICA
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
https://repositorio.ufrn.br/jspui/handle/123456789/25111
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Resumo: |
O antígeno 503, uma proteína encontrada na forma amastigota de Leishmania i. chagasi, possui potencial para utilização em vacinas e testes para diagnóstico específico da leishmaniose visceral. No entanto, um problema intrínseco à purificação de proteínas expressas em E. coli é a presença de endotoxinas (LPS), componente da parede celular de bactérias gram-negativas, que provoca resposta imune quando em contato com células de defesa humana. Os sistemas aquosos bifásicos (SABs) vêm sendo utilizados na purificação de biomoléculas por apresentar vantagens como eliminar a etapa de clarificação, concentrar e purificar a molécula alvo e, no presente estudo, efetuar a remoção parcial do LPS, durante o protocolo de purificação. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os SABs baseados em polietilenoglicol (PEG 1500) e etanol com sais (fosfato de potássio dibásico (K2HPO4) e sulfato de amônio ((NH4)2SO4)) e acetonitrila com glicose na recuperação e purificação parcial do antígeno 503 de Leishmania i. chagasi expresso em E. coli M15 com remoção simultânea de LPS. Inicialmente, foram obtidas as curvas binodais, pelo método de titulação por ponto de nuvem a temperatura ambiente (25 ± 2 ºC) a fim de determinar as concentrações de trabalho dos componentes dos sistemas avaliados. Esses dados experimentais também foram usados para os cálculos dos parâmetros da equação proposta por Merchuk, e obtenção do comprimento das linhas de amarração – tie lines length (TTL). Definindo-se a composição dos sistemas, aplicou-se 20% de homogeneizado celular de E. coli nos SABs, observou-se que o sistema que mais favoreceu a recuperação e concentração do antígeno 503 foi o constituído por PEG 1500 e K2HPO4, atingindo um fator de purificação de 1,55 e percentual de recuperação de 116,96% na fase de topo, nas condições de 30% de PEG 1500 e 10% de sal (m/m). A remoção de LPS foi promissora para todos os sistemas avaliados, se mantendo acima de 90,0%. O ensaio que apresentou melhor purificação também se destacou na remoção desse contaminante, atingindo 99,90% de LPS removido. Deste modo, os SABs podem ser empregados como etapa precedente à cromatografia para remoção de elevadas concentrações de LPS e aumentar o grau de pureza de proteínas recombinantes expressas em E. coli. |
