Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2017 |
| Autor(a) principal: |
CARVALHO, Brenna Celina Ferreira de
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| Orientador(a): |
OLIVEIRA, Joacir Stolarz de |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Universidade Federal do Oeste do Pará
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| Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-Graduação em Recursos Naturais da Amazônia
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| Departamento: |
Instituto de Engenharia e Geociências
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| País: |
Brasil
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| Palavras-chave em Português: |
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| Área do conhecimento CNPq: |
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| Link de acesso: |
https://repositorio.ufopa.edu.br/jspui/handle/123456789/259
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Resumo: |
As peçonhas de escorpiões são fontes de moléculas bioativas como os Peptídeos Antimicrobianos (PAMs). Tais moléculas pertencem à imunidade inata e são ubíquas no reino animal e vegetal. Este trabalho teve o objetivo de purificar e caracterizar um peptídeo antimicrobiano extraído da peçonha do escorpião T. obscurus da região Oeste do Pará, Brasil. A coleta dos animais ocorreu na Floresta Nacional do Tapajós e a extração das peçonhas foi feita através da técnica de eletroestimulação usando uma fonte elétrica. O perfil eletroforético foi determinado pela eletroforese em gel de poliacrilamida 15% SDS-PAGE. O peptídeo antimicrobiano purificado (P42) teve eluição em 42 min através da Cromatografia Líquida de Alta Eficiência em fase reversa (rp-CLAE). Os ensaios antimicrobianos foram realizados com bactérias Escherichia coli Gram (-), Staphylococcus aureus Gram (+) e com fungos Candida albicans, C. tropicalis e C. parasiplosis através de métodos padronizados de sensibilidade por disco difusão e de determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) protocolados pela Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), para fungos (normas M44-A e M27-A2) e bactérias (norma M2A-9). O efeito hemolítico de P42 foi testado em eritrócitos de camundongos e para monitorar a cinética de sua citotoxicidade foram geradas imagens por microscopia confocal. A massa molecular de P42 foi obtida através da técnica de espectrometria de massas MALDI-TOF e a sua sequência de aminoácidos através da Degradação de Edman. O peptídeo (P42) foi ativo apenas contra o fungo C. albicans e a sua massa molecular foi de 7284,4 Da. Os valores de CIM do peptídeo contra as espécies de Candida foi 3,5 - 7,0 μM e para o fluconazol 6,0 - 12,0 mM. P42 não foi hemolítico em eritrócito de camundongos. A microscopia confocal detectou DNA espalhado após 3h de tratamento com o peptídeo natural. A estrutura primária desse peptídeo consistiu de 30 aminoácidos e 97% de identidade com a toxina To4 de T. obscurus. Esses resultados demonstram, pela primeira vez, a existência de um PAM nativo obtido diretamente da peçonha de T. obscurus, expandindo as opções de possíveis novas aplicações terapêuticas. |
