OUABAÍNA INDUZ NEUROPROTEÇÃO EM CÉLULAS DA RETINA: PAPEL DAS INTERLEUCINAS 2 E 10

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Figueiredo, Camila Saggioro de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Ouabaína; Na+/K+ ATPase; Interleucina-2; Interleucina-10; Retina; Fármacos Neuroprotectores; Células Ganglionares da Retina; Efeitos dos fármacos; Ouabain; Interleukin 2; Interleukin 10
• Link de acesso: https://app.uff.br/riuff/handle/1/37232

A perda de visão em doenças retinianas frequentemente decorre da degeneração das células ganglionares da retina (CGRs), responsáveis pela transmissão de informações visuais ao cérebro. Até o momento, a busca por tratamentos farmacológicos eficazes para prevenir a morte dessas células tem sido um desafio. Estudos anteriores destacaram os efeitos neuroprotetores da ouabaína, um ligante da Na+/K+ATPase, e das interleucinas (IL)-2 e IL-10 em CGRs submetidas à axotomia. Contudo, os mecanismos subjacentes aos efeitos da ouabaína ainda são pouco compreendidos. Nossa hipótese foi que os efeitos neuroprotetores da ouabaína na retina são mediados por um mecanismo dependente da síntese e sinalização de IL-2 e IL-10. Utilizamos culturas primárias de retina de ratos, submetendo-as a diferentes tratamentos, incluindo ouabaína e/ou anticorpos para IL-10 ou IL-2, inibidores da síntese proteica, do transporte vesicular, e da metaloprotease-9 (MMP-9), por diferentes períodos. Para avaliar a sobrevivência das células após a axotomia do nervo óptico, as CGRs foram marcadas in vivo com peroxidase (HRP), e análises quantitativas da sobrevivência das CGRs foram realizadas após tratamento in vitro com ouabaína e/ou anticorpos para IL-10 ou IL-2 por 48 horas. Avaliamos os níveis de expressão da IL-10, IL-2 e receptores de IL-2 por Western Blotting (WB). Para identificar os tipos celulares expressando IL-2/IL-10, realizamos dupla marcação por imunofluorescência para IL-2 ou IL-10 e Brn3a, um marcador de CGRs. Realizamos análises de bulk RNA-Seq em culturas tratadas ou não com ouabaína por 24 horas. Por fim, avaliamos também as vias de síntese proteica. Nossos resultados indicam que a ouabaína influencia a síntese e liberação temporal de IL-2 e IL-10, além de modular a expressão do receptor da IL-2 nas células da retina. A ouabaína induziu a clivagem do receptor de IL-2 de maneira dependente da MMP-9. Demonstramos que cerca de 50% das CGRs positivas para Brn3a também são positivas para IL-2 ou IL-10, e que a ouabaína modula a expressão destas citocinas. Além disso, o tratamento com ouabaína impediu a morte de CGRs axotomizadas por mecanismos dependentes de IL-2/IL-10 e regulação da síntese proteica. Através das análises de RNA-Seq e do ensaio de SUnSET, demonstramos que a ouabaína induz a expressão de genes associados à tradução de RNAm e aumenta rapidamente a síntese de proteínas nas células da retina. Em resumo, a ouabaína regula a sinalização de IL-2/IL-10 na retina e a síntese proteica, desempenhando um papel crucial na restauração da homeostase celular e proteção das CGRs após a axotomia do nervo óptico.