Caracterização fenotípica e molecular de amostras de Escherichia coli rbfo113- positivas isoladas de bovinos sadios em Miracema, RJ

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Guimarães, Cecília Matheus
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal Fluminense; Niterói
• Palavras-chave em Português: STEC; O113:H21; Bovinos; PFGE; Escherichia coli
• Link de acesso: https://app.uff.br/riuff/handle/1/6684

Os ruminantes, especialmente os bovinos, são reservatórios de amostras de Escherichia coli produtora de toxina Shiga (STEC), um enteropatógeno que causa doenças em humanos desde diarreia até colite hemorrágica e síndrome urêmica hemolítica (HUS). Este microrganismo apresenta elevada persistência no ambiente, variando de semanas a meses. A sua ampla disseminação pode estar associada à contaminação de ambientes aquáticos próximos aos locais de criação dos animais. O sorotipo O113:H21 tem sido isolado de pacientes com HUS e apresenta uma alta ocorrência em animais. Apesar de ser freqüentemente isolado no Brasil, este sorotipo ainda não foi relatado causando doenças em humanos. O presente estudo teve como objetivo realizar caracterização fenotípica e molecular de 29 amostras rfbo113-positivas isoladas de bovinos sadios do município de Miracema RJ para avaliar a ocorrência de genótipos potencialmente virulentos para o homem e, também a manutenção do microrganismo no ambiente. A ocorrência dos genes cromossômicos stx1, stx2, genes stx2, stx2c, stx2d e stx2f das variantes do tipo II da toxina SHIGA, rbfo113, iha, irp2, escC, escJ, astA, cdt-VB, IpfAo113 e efa1 5' e dos genes plasmidiais saa, esP, subA, pilS, toxB, ehxA e etpD foi analisada através de ensaios de PCR. Extração plasmidial foi realizada para caracterização de plasmídios de alto peso molecular. Testes fenotípicos de fermentação do sorbitol, produção de enterohemolisina e efeito citotóxico em células Vero foram realizados. Adicionalmente, testes de amplificação randômica (RAPD) com dois iniciadores distintos e eletroforese de campo pulsado (PFGE) foram realizados, a fim de avaliar a similaridade genética das amostras e sua distribuição e persistência nos animais. Todos os isolados foram positivos para os genes rfb0113 e Ipf0113. com exceção d quatro amostras, todas foram positivas para gene stx2, sendo seis também positivas para stx1. A ocorrência do subtipo stx2 isolado foi mais frequente e os fatores de virulência foram detectados e dois destes possuíam a ocorrência simultânea de 10 genes. O genótipo mais frequente (n=12) apresentou nove genes de virulência (stx2 / stx2v / espP / pilS / saa / subA / iha / ehxA / Ipfo113). A maioria das amostras (82,27% e 65,5%) foram fenotipicamente positivas para a fermentação de sorbitol e produção de enterohemolisina, respectivamente. Todas as amostras positivas para genes stx demonstraram efeito citotóxico. A presença de plasmídiosde alto peso molecular foi comum entre as amostras (69,9%). o menor índice de similaridade entre as amostras que apresentaram capacidade de persistência e disseminação, também foi observado grande potencial patogênico uma vez que demonstraram perfis de virulência com nove ou dez genes. Algumas diferenças foram encontradas, mas de maneira geral, foi possível detectar a ocorrência de amostras comuns em animais e períodos distintos, inclusive em diferentes rebanhos. Assim como também em detectou-se a presença de estirpes não relacionadas no mesmo animal e no mesmo período. O conjunto dos dados obtidos demonstra que, além da elevada ocorrência de genótipos potencialmente patogênicos para o homem, os microrganismos são capazes de permanecer no ambiente e no animal por um longo período ou então circular no ambiente, inclusive entre rebanhos. A presença comum de STECO113:H21 no reservatório animal representa um risco que não deve ser negligenciado, ao contrário, investigações mais amplas devem ser realizadas em busca de estirpes de maior potencial patogênico.