Caracterização das células tronco da polpa dentária obtidas de indivíduos com neurofibromatose tipo 1 e sua utilização para estudo in vitro ed condrócitos diferenciados em cultivo bi e tridimensional

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Almeida, Paula Nascimento
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Neurofibromatose 1; Células-tronco da polpa dentária; Condrogênese; Neurofibromatose; Célula-tronco; Polpa dentária; Neurofibromatosis 1; Dental pulp stem cell; Chondrogenesis
• Link de acesso: http://app.uff.br/riuff/handle/1/27160

Introdução: A neurofibromatose tipo 1 é uma síndrome genética com grande variedade de manifestações clínicas e estudos procurando compreender os mecanismos celulares e moleculares subjacentes às suas manifestações clínicas são de grande importância para melhor conhecimento da patogenia e desenvolvimento de novas terapêuticas. As células-tronco da polpa dentária estão sendo usadas como modelo in vitro para várias doenças genéticas e são uma alternativa interessante para o estudo da neurofibromatose tipo 1. Objetivo: Caracterizar as células-tronco da polpa dentária de indivíduos com neurofibromatose tipo 1 e investigar seu potencial in vitro de diferenciação condrogênica. Material e Métodos: Células-tronco da polpa dentária de indivíduos com e sem neurofibromatose tipo 1 foram obtidas a partir de terceiros molares com indicação de exodontia. A análise da expressão de antígenos de superfície, o potencial clonogênico e perfis de proliferação e senescência nas culturas NF (de indivíduos com neurofibromatose tipo 1) foram avaliados e comparados com culturas controles. Como parte da caracterização das células-tronco da polpa dentária, avaliou-se a diferenciação osteogênica e adipogênica, além da condrogênica, em cultivo bidimensional. A diferenciação condrogênica também foi realizada em cultivo tridimensional (pellets) e avaliada utilizando microscopia ótica, com os cortes corados com hematoxilina e eosina e Alcian Blue. Os cortes também foram submetidos à técnica de imuno-histoquímica para avaliação da expressão do Ki-67. Além disto, os pellets foram avaliados morfologicamente através de cortes semifinos e de microscopia eletrônica de transmissão. Resultados: As células-tronco da polpa dentária, tanto das duas culturas NF quanto das três culturas controles, foram positivas para CD90, CD105, CD146 e negativas para CD13, CD14, CD45 e CD271. As culturas NF mostraram maior potencial proliferativo e senescência tardia comparadas com as culturas controles. Não houve diferença significativa na quantidade de depósitos lipídicos entre as culturas NF e controles após a diferenciação adipogênica. No cultivo bidimensional, observou-se diferença significativa na produção de cálcio e matriz extracelular após as diferenciações osteogênica e condrogênica, respectivamente, entre culturas NF e controles. As culturas NF produziram metade do cálcio produzido pelo grupo controle. Em contrapartida, observou-se maior deposição de matriz extracelular nas culturas NF após diferenciação condrogênica. A avaliação morfológica dos pellets evidenciou sucesso na diferenciação condrogênica em todas as culturas, apresentando-se corados pelo Alcian Blue. Nos cortes semifinos, as culturas NF mostraram vesículas de matriz de tamanhos variados, enquanto que nas culturas controles o tamanho manteve-se homogêneo. Em todas as culturas celulares, vesículas estavam presentes no citoplasma e extracelularmente. A análise da microscopia eletrônica de transmissão dos pellets diferenciados corrobora com os dados encontrados na diferenciação condrogênica em cultivo bidimensional. Maior quantidade de fibras controles. Conclusão: As células-tronco da polpa dentária de indivíduos com neurofibromatose tipo 1 apresentam diferenças significativas com relação à produção de matriz durante o processo de condrogênese in vitro, em modelos bi e tridimensionais, comparadas com as controles, sendo, portanto, ferramentas úteis para estudos futuros sobre patogênese das alterações ortopédicas e possível desenvolvimento de novas terapias.