Estudo in vitro dos mecanismos de ação antitumoral do composto LQB-461 em células de leucemia Jurkat

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Thimoteo, Rachell Ramalho Correia
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade do Estado do Rio de Janeiro; Centro Biomédico::Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes; Brasil; UERJ; Programa de Pós-Graduação em Biociências
• Palavras-chave em Português: Cell proliferation; Apoptosis; Transcriptome; Benzaldehyde; Cinnamaldehyde; Proliferação celular; Apoptose; Transcriptoma; Benzaldeído; Cinamaldeído; CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR
• Link de acesso: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/19399

As leucemias se destacam como o principal tipo de câncer infantil no mundoe os atuais tratamentos apresentam fortes efeitos colaterais, havendo ainda possibilidade do desenvolvimento de resistência à terapia. Diversas pesquisas buscam desenvolver novas moléculas hibridas que apresentem melhor eficácia terapêutica. Estudos prévios relacionados à estrutura-atividade antileucêmica in vitro de análogos do LQB-278, destacou o LQB-461(hibrido benzaldeído e cinamoil com inseção de um grupamento nitro) devido à potencialização dos seus efeitos, e aumento de p21, com inibição da proliferação sem induzir morte (2 e 3 μM), ou acompanhado de morte por apoptose (5 μM). Neste contexto, este trabalho avaliou os mecanismos de ação de LQB 461 envolvidos nos seus efeitos citostático e indutor de apoptose em células Jurkat. Para análise dos genes e vias envolvidas nos mecanismos de ação do LQB-461 realizou-se um ensaio de transcriptoma (Microarranjo). A expressão do gene CDKN1A (que codifica o p21) se mostrou aumentada, confirmado por PCRq (p<0,01) com 5 μM. Observou-se também aumento (p<0,05) de processos biológicos indutores de apoptose (3 e 5 μM), destacando-se a via intrínseca de apoptose. Através da citometria de fluxo (FACS), demonstrou-se aumento significativo da razão Bax/Bcl-2 nas três concentrações testadas, com alterações de Bax (p<0,05) e Bcl-2 (p<0,001) também observadas por PCRq em algumas concentrações. O tratamento com LQB-461 aumentou (p<0,001) a expressão do receptor Fas e a caspase-3 ativa (p<0,001) com 5 μM, por FACS. Através do transcriptoma, observamos inibição (p<0,05) de processos biológicos de síntese proteica (3 μM), e regulação negativa para mediadores da via do mTOR, principal reguladora da proliferação e tradução de proteínas. Ensaios preliminares por Western Blotting (WB) sugerem diminuição da razão mTOR-P/mTOR (3 μM). Pela mesma técnica, o LQB-461 parece aumentar (com 2 e 3 μM) a expressão da proteína S6KP70, indutora de síntese de proteínas, e diminuí-la com 5 μM. No transcriptoma, encontramos expressão diminuída do gene RPS6KB1, codificador da isoforma S6K1, ativada pelo mTOR, com LQB-461 a 3μM e 5μM. Ainda por WB, a proteína RB1, inibidora da via Akt/mTOR, parece ter sua expressão aumentada em 2 e 3 μM e diminuída em 5 μM. A modulação da autofagia também foi avaliada, por poder promover apoptose, resistência e proliferação. O transcriptoma mostrou aumento (p<0,05) de processos biológicos autofágicos (3 μM) e inibição (5 μM). Observou-se também, por WB, expressão aumentada (p<0,05) do marcador autofágico LC-3, (2 e 3 μM), e diminuida (p<0,001) em 5 μM. Concluindo, o LQB-461 promove um efeito citostático em células Jurkat (3 μM), inibindo a proliferação, através da diminuição da síntese de proteínas. A apoptose não é observada nesta concentração, sugerindo atuação de mecanismos de resistência celular, dentre eles a autofagia. Na maior concentração (5 μM), o LQB-461 parece inibir mecanismos autofágicos, ativando as vias intrínseca e extrínseca de apoptose de forma caspase dependente. O LQB-461 parece atuar em múltiplos mecanismos de ação, destacando-se como uma alternativa promissora no tratamento das leucemias linfocíticas agudas.