Caracterização do meio condicionado e das vesículas extracelulares pelo tecido adiposo de indivíduos obesos e seus efeitos de células tumorais de mama

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Andrade, Isadora Ramos de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade do Estado do Rio de Janeiro; Centro Biomédico::Instituto de Biologia Roberto Alcantara Gomes; Brasil; UERJ; Programa de Pós-Graduação em Biociências
• Palavras-chave em Português: Obesity; Adipose tissue; Extracellular vesicles; Breast cancer; Epithelial-mesenchymal transition; Obesidade; Tecido adiposo; Vesículas extracelulares; Câncer de mamaxx; Transição epitelial-mesenquimal; CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL
• Link de acesso: http://www.bdtd.uerj.br/handle/1/18747

A obesidade é uma doença multifatorial caracterizada por um quadro de metainflamação sustentada pelo tecido adiposo (TA). Evidências mostram que a obesidade está relacionada a um pior prognóstico e um risco aumentado de morte em mulheres com câncer de mama, o tipo de câncer mais comum entre mulheres. O TA de indivíduos obesos além de secretar adipocinas pró-infamatórias, produz ativamente um maior número de vesículas extracelulares (VEs), que são pequenas vesículas de membrana capazes de transferir sua carga para células-alvo. Mostramos anteriormente que o meio condicionado (MC) e as VEs secretadas pelo TA branco modulam a atividade migratória e proliferativa de células de câncer de mama, sugerindo seu papel na modificação do microambiente tumoral para um perfil mais maligno. Um dos processos relacionados ao aumento da malignidade tumoral é a transição epitelial-mesenquimal (TEM), a qual é definida pela perda de características epiteliais e aquisição do fenótipo mesenquimal, acarretando no aumento na capacidade migratória e invasiva. Neste estudo, objetivamos caracterizar o secretoma (MC e VEs) liberado pelos explantes de TA visceral (TAV) e subcutâneo (TAS) branco de indivíduos magros e obesos, e propor possíveis candidatos relacionados ao aumento da malignidade observada nas linhagens de adenocarcinoma mamário humano: MCF-7 (tipo luminal A) e MDA-MB-231 (tipo basal). O modelo, já estabelecido em nosso laboratório, é realizado a partir da cultura de explantes de TA obtidos de pacientes obesos ou magros que foram submetidos à cirurgia bariátrica ou plástica, respectivamente. No MC, o perfil lipídico foi analisado por cromatografia gasosa; o painel de adipocinas foi avaliado por Milliplex; a carga proteica presente nas VEs foi analisada por proteômica e Western blotting; a expressão de marcadores relacionados à TEM nas células tumorais de mama foram avaliadas por Western blotting; os fatores de transcrição foram avaliados por q-PCR; o ensaio de migração foi realizado através da técnica de wound healing. Nossos resultados demonstraram que comparando o MC oriundo dos explantes de TAS, o TAS obeso apresentou maiores níveis TGF-β1, apresentando correlação positiva com o IMC. Ao comparar o MC dos explantes de TAV, o TAV obeso apresentou maiores níveis de IL-6, TGF-β 2 e 3, sem correlação com o IMC. Além disso, o TAV obeso apresentou maior liberação de ácidos graxos saturados como os ácidos palmítico, láurico, mirístico e esteárico, além dos ácidos graxos oleico (monoinsaturado) e linoleico (poliinsaturado). Em comparação aos indivíduos magros, as VEs liberadas pelo TA de indivíduos obesos apresentaram aumento de proteínas relacionadas à progressão tumoral, como a S100A4, S100A11, TGF-β e vimentina. O MC e as VEs do TA obeso induziram o aumento na migração das células MCF-7 em comparação ao controle, além de diminuírem a expressão do marcador epitelial E-caderina. Nas células MDA-MB-231 não vimos alteração do marcador mesenquimal vimentina entre os grupos. As VEs do TA obeso induziram diminuição de CDH1, Slug e aumento de Snail nas células MCF-7, enquanto nas células MDA-MB-231 também induziram o aumento de Snail. As VEs do TA obeso também induziram ativação da via TGF-β/SMAD nas células MCF-7. Em conjunto, nossos dados indicam que as VEs derivadas do TA de indivíduos obesos apresentam proteínas com propriedades pró-tumorais que aumentam a malignidade de células tumorais através diminuição de E-caderina e aumento de migração.