Validação de um sistema para análise funcional de genes em Phakopsora pachyrhizi via silenciamento gênico mediado por aplicação ectópica de dsRNA

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Costa, Roberta de Paula Saturnino
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Norte do Paraná; Brasil; UENP/CLM::CCA; UENP; PPAGRO
• Palavras-chave em Português: RNAi; Ferrugem Asiática; Soja; Aplicação exógena; dsRNA; Agronomia; Ciências Agrárias
• Link de acesso: https://repositorio.uenp.edu.br/handle/123456789/485

O mecanismo de silenciamento gênico (RNAi) mediado pela aplicação direta de dsRNA vemse tornando uma estratégia promissora tanto para a análise funcional de genes quanto para ocontrole de pragas e patógenos. Embora ainda não se conheça a maquinaria de silenciamentode Phakopsora pachyrhizi, a possibilidade de uso desse sistema para um fungo biotrófico comalto poder destrutivo sobre a soja, uma das principais commodities mundiais, se tornaespecialmente atrativa. Nós realizamos a pulverização direta de GFP-dsRNA em folhasdestacadas de soja e observamos que o dsRNA é absorvido pelas folhas e permanece sendodetectado nas mesmas ao longo de todo o ciclo de infecção do fungo, sendo ainda transmitidopara a primeira geração de esporos. Foi possível observar ainda que os GFP-dsRNA sãoprincipalmente observados no tubo germinativo dos esporos. Posteriormente utilizamos comoalvo um candidato a gene essencial para o desenvolvimento de P. pachyrhizi (de_novo_4692)e observamos um efeito de silenciamento dose dependente de 86,6%, sendo o máximo efeitodetectado na menor dose utilizada (50 ng/μL). O ensaio de fenotipagem para a severidade dadoença nas folhas destacadas silenciadas mostrou significativa redução nos sintomas dadoença. Tais resultados indicam que a aplicação direta de dsRNA sobre as folhas é eficaz eminduzir o silenciamento de genes alvo no fungo sugerindo portanto que essa estratégia possuipotencial para ser utilizada em estudos funcionais e ainda possa representar uma alternativapotencial e inovadora com relação ao uso de fungicidas.