Avaliação da criopreservação e ativação de espermatozóides de carpa comum, Cyprinus carpio L. em meio a base de água de coco em pó, (ACP-104) utilizando análise computadorizada e sondas fluorescentes

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Carvalho, Maria Audália Marques de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso embargado
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Água de coco em pó; Biotecnologia; Integridade membrana; Sondas fluorescentes
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=106761

<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O presente estudo teve por objetivos avaliar o comportamento cinético e osmótico dos&nbsp;</span></font><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">espermatozoides (sptz) frescos de carpa comum, Cyprinus carpio diluídos em água de&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">coco em pó (ACP-104) combinado aos crioprotetores dimetilsulfóxido (DMSO) e&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">metilglicol (MG), avaliar o ACP-104A (150 mOsmol/kg H2O) como solução de ativação&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">e verificar a integridade da membrana de sptz congelados em ACP-104 através do uso&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">das sondas fluorescentes diacetato de carboxifluoresceína (DACF) e iodeto de propídio&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">(IP). O sêmen formando pools foi misturado aos diluentes ACP- 04 (pH 8.0; 300&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">mOsmol/ kg H2O) + DMSO e ACP-104 + MG. As amostras diluídas foram envasadas&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">em palhetas de 0,5 ml e congeladas em vapores de nitrogênio líquido a -170 ºC em Dry&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">Shipper e estocados em nitrogênio líquido a -196 ºC. Os sptz descongelados a 25 ºC por&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">30 segundos foram avaliados sem uso de ativador e após adição das soluções ativadoras&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">ACP-104A (150 mOsmol/kg H2O) ou NaCl (100 mOsmol/kg H2O) quanto à cinética&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">através da análise computadorizada (CASA). A motilidade foi registrada após 10s da&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">ativação quanto à motilidade total (% MT) e velocidades, sendo analisados 200&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">sptz/campo. O teste de comparações múltiplas demonstrou que o sêmen congelado em&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">ACP-104+DMSO resultou em melhores motilidade e velocidades, assim como a&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">solução ativadora ACP-104A apresentou os melhores resultados de motilidade pósdescongelação&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">quando comparada à solução NaCl (p &gt; 0,05). No segundo experimento,&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">o sêmen criopreservado em ACP-104+DMSO e Alsever+DMSO foi submetido ao teste&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">de integridade de membrana através das sondas fluorescentes diacetato de&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">carboxifluoresceína (DACF) e iodeto de propídio (IP). Alíquotas de 10 [l de sêmen&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">descongelado foram colocadas em quatro tubos Eppendorf de 1,5 ml, protegidos da luz,&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">contendo 100 [l de uma das soluções ACP-104, ACP-104A, NaCl e Alsever, com 300,&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">150, 100, e 150 mOsm/kg H2O, respectivamente. Cada um recebeu 5[l de DACF e,&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">após cinco minutos de incubação, foram adicionados 10 [l de IP, incubando-se por mais&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">cinco minutos no escuro. Alíquotas de 10 [l de cada tubo foram avaliadas entre lâmina&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">e lamínula, em microscópio de epifluorescência (400x), quanto ao percentual de sptz&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">íntegros (cor verde pelo DACF) e danificados (cor vermelha pelo IP). Duzentos sptz&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">foram contados em cada lâmina. Houve uma redução significativa no percentual de sptz&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">móveis no sêmen congelado (36,12 ± 1,9%) em relação ao sêmen fresco (93,0 ± 6,2%)&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">quando ativados nas diferentes soluções. O percentual de sptz móveis em foi de 35,94 ±&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">17,96% no diluente ACP-104 e 32,14 ± 18,87% em meio de Alsever, respectivamente&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">(p&gt;0,05). Contudo, não houve diferença significativa entre os diluentes, nem entre as&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">soluções ativadoras. Um elevado grau de danos foi observado através do teste de&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">integridade de membrana com CFDA/IP, sendo este teste eficiente na detecção de danos&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">celulares e na predição da viabilidade de sptz criopreservados em ACP-104, juntamente&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">com o teste de motilidade objetiva pelo CASA. Diversos estudos serão ainda&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">necessários para o aperfeiçoamento do protocolo usando o Dry Shipper como método&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">de congelação para reduzir o percentual de aglutinação e aumentar o percentual de sptz&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">íntegros.&nbsp;</span></div><div style=""><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">Palavras-chave: Água de coco e pó, sondas fluorescentes, integridade membrana,&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">ativação.</span></div>