Aplicação de biópsias de fígado,baço e testículo visando estudos de expressão gênica em caprinos transgênicos

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Melo, Carlos Henrique Sousa de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Caprinos
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=88416

<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Este trabalho objetivou avaliar a aplicação de diferentes técnicas de biópsia para</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">obtenção de amostras teciduais de fígado, baço e testículo, visando estudos de expressão</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">gênica em caprinos. Seis machos Canindé foram utilizados, dois pertencentes à</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">linhagem transgênica 10M para o Fator Estimulante de Colônia de Granulócitos</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">humanos (hG-CSF; T) e quatro não transgênico (NT). Dois animais NT não foram</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">submetidos a nenhum procedimento de biópsia e utilizados como controles</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">comportamentais. O tempo de cada procedimento, o número de tentativas por biópsia e</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">o peso do fragmento foram registrados. Foram realizadas biópsias de baço e fígado</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">guiadas por ultrassonografia (US) e laparoscópica (LAP). As biópsias testiculares foram</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">realizadas de forma percutânea com agulha Tru-Cut e 100 dias após as mesmas,</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">avaliações seminais foram realizadas. Após a realização dos procedimentos os animais</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">foram avaliados nas primeiras 24 h (a cada 8h) para verificar manifestações de dor,</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">levando em consideração a curvatura do dorso, dificuldade em se mover e diminuição</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">do apetite. Um acompanhamento ultrassonográfico dos órgãos biopsiados foi realizado</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">nas primeiras 48 h. Além disso, durante o período experimental, os animais foram</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">submetidos a exames clínicos. O RNA total foi extraído utilizando RNeasy mini kit de</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">acordo com as instruções do fabricante e quantificado por fluorimetria. As</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">amplificações do qPCR foram realizadas no Master-Cycler EP Realplex 4 S para os</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">seguintes genes: SP1, BAFF, GAPDH e hG-CSF. Para a biópsia hepática,</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">respectivamente, o tempo operatório médio, o número de tentativas, peso do fragmento</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">e rendimento de RNA nos grupos US (10,0 ± 1,5 min; 1,1 ± 0,2; 23,2 ± 1,0 mg; 1.0 ±</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">0.5 Xg RNA/mg) e LAP (13,7 ± 2,5 min; 1,1 ± 0,2; 21,7 ± 1,3; 1,0 ± 0,3) foram</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">similares (P&gt;0,05). De forma análoga, para a biópsia esplênica o grupo US (9,2 ± 0,9</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">min; 1,4 ± 0,3; 20,1 ± 1,1 mg; 0,4 ± 0,04 Xg RNA/mg) e LAP (13,7 ± 1,3 min; 1,3 ±</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">0,4; 19,5 ± 1,9 mg; 0,5 ± 0,05 Xg RNA/mg) sendo P&lt;0,05 apenas para o tempo</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">operatório. Já biópsia testicular 12,2 ± 1,9 min; 1,0 ± 0,0; 21,2 ± 1,8 mg; 2,0 ± 0,2 Xg</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">RNA/mg), além disso, não ocorreu alteração nos parâmetros seminais avaliados. Para</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">todos os órgão, os parâmetros clínicos avaliados permaneceram dentro dos valores</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">normais para a espécie. Os transcritos de SP1 e BAFF foram detectados com sucesso de</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">forma semelhante em ambos os métodos em fígado e baço, respectivamente. Em relação</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">aos níveis de transcrição de hG-CSF, não foram detectados em nenhum dos tecidos</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">estudados, sugerindo que não há expressão ectópica nestes órgãos. As execuções dos</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">9</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">métodos de biópsia utilizados nesse estudo permitem a obtenção de amostras teciduais</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">de fígado, baço e testículo sem a ocorrência de processos dolorosos intensos.</span></font></div>