Aplicação de biópsias de fígado,baço e testículo visando estudos de expressão gênica em caprinos transgênicos - Melo, Carlos Henrique Sousa de (2013)
Este trabalho objetivou avaliar a aplicação de diferentes técnicas de biópsia para obtenção de amostras teciduais de fígado, baço e testículo, visando estudos de expressão gênica em caprinos. Seis machos Canindé foram utilizados, dois pertencentes à linhagem transgênica 10M para o Fator Estimulante de Colônia de Granulócitos humanos (hG-CSF; T) e quatro não transgênico (NT). Dois animais NT não foram submetidos a nenhum procedimento de biópsia e utilizados como controles comportamentais. O tempo de cada procedimento, o número de tentativas por biópsia e o peso do fragmento foram registrados. Foram realizadas biópsias de baço e fígado guiadas por ultrassonografia (US) e laparoscópica (LAP). As biópsias testiculares foram realizadas de forma percutânea com agulha Tru-Cut e 100 dias após as mesmas, avaliações seminais foram realizadas. Após a realização dos procedimentos os animais foram avaliados nas primeiras 24 h (a cada 8h) para verificar manifestações de dor, levando em consideração a curvatura do dorso, dificuldade em se mover e diminuição do apetite. Um acompanhamento ultrassonográfico dos órgãos biopsiados foi realizado nas primeiras 48 h. Além disso, durante o período experimental, os animais foram submetidos a exames clínicos. O RNA total foi extraído utilizando RNeasy mini kit de acordo com as instruções do fabricante e quantificado por fluorimetria. As amplificações do qPCR foram realizadas no Master-Cycler EP Realplex 4 S para os seguintes genes: SP1, BAFF, GAPDH e hG-CSF. Para a biópsia hepática, respectivamente, o tempo operatório médio, o número de tentativas, peso do fragmento e rendimento de RNA nos grupos US (10,0 ± 1,5 min; 1,1 ± 0,2; 23,2 ± 1,0 mg; 1.0 ± 0.5 Xg RNA/mg) e LAP (13,7 ± 2,5 min; 1,1 ± 0,2; 21,7 ± 1,3; 1,0 ± 0,3) foram similares (P>0,05). De forma análoga, para a biópsia esplênica o grupo US (9,2 ± 0,9 min; 1,4 ± 0,3; 20,1 ± 1,1 mg; 0,4 ± 0,04 Xg RNA/mg) e LAP (13,7 ± 1,3 min; 1,3 ± 0,4; 19,5 ± 1,9 mg; 0,5 ± 0,05 Xg RNA/mg) sendo P<0,05 apenas para o tempo operatório. Já biópsia testicular 12,2 ± 1,9 min; 1,0 ± 0,0; 21,2 ± 1,8 mg; 2,0 ± 0,2 Xg RNA/mg), além disso, não ocorreu alteração nos parâmetros seminais avaliados. Para todos os órgão, os parâmetros clínicos avaliados permaneceram dentro dos valores normais para a espécie. Os transcritos de SP1 e BAFF foram detectados com sucesso de forma semelhante em ambos os métodos em fígado e baço, respectivamente. Em relação aos níveis de transcrição de hG-CSF, não foram detectados em nenhum dos tecidos estudados, sugerindo que não há expressão ectópica nestes órgãos. As execuções dos 9 métodos de biópsia utilizados nesse estudo permitem a obtenção de amostras teciduais de fígado, baço e testículo sem a ocorrência de processos dolorosos intensos.