TRANSFECÇÃO DE FOLÍCULOS SECUNDÁRIOS OVINOS PARA A ATENUAÇÃO DA AQUAPORINA 3 POR RNAi E SEU EFEITO SOBRE O DESENVOLVIMENTO FOLICULAR IN VITRO

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: PAZ, MARCELA PINHEIRO
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Reprodução animal
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=83320

<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">RESUMO</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Relatos indicam que as aquaporinas (AQPs), em especial a AQP3, podem estar</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">envolvidas no processo de formação do antro em folículos ovarianos, no entanto, essa</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">informação ainda não foi completamente comprovada. Portanto, este trabalho teve como</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">objetivo investigar a participação da AQP3 no desenvolvimento de folículos ovarianos</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">ovinos cultivados in vitro, após o silenciamento gênico pós-transcricional (SGPT) ou</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">knockdown para o mRNA dessa proteína. Inicialmente, foi desenvolvido um protocolo</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">de transfecção utilizando o complexo de transfecção (CT) Lipofectamine® (volumes:</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">0,5; 0,75 ou 1,0 &#956;l) + o oligonucleotídio fluorescente BLOCK-iT™ (concentrações:</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">18,03; 27,12 ou 36,16 nM), por diferemtes tempos de incubação (12, 14, 16, 18 or 20</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">h). Os resultados mostraram que as melhores condições de transfecção foram 0,75 &#956;l de</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Lipofectamine® + 27,12 nM de BLOCK-iT™ incubando-se por 12 h. O knockdown da</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">AQP3 foi realizado substituindo o BLOCK-iT™ pelo siRNA-AQP3 no CT. Folículos</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">secundários foram distribuídos aleatoriamente em grupos: Controle não-transfectados</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">(CD3 e CD6), transfectados com siRNA inespecífico (Negative Control Transfection -</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">tNEG) ou com siRNA-AQP3 nos dias 0 (t0D3 ou t0D6), 3 (t3D6) ou 0 e 3 (t0/3D6) e então</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">cultivados in vitro por 3 ou 6 dias. Após o cultivo, os folículos foram submetidos às</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">avaliações: expressão gênica e proteica, integridade e extrusão e ainda o</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">desenvolvimento folicular (crescimento, diâmetro e formação da cavidade antral). A</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">AQP3 foi imunolocalizada em todas as estruturas foliculares, embora a expressão</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">gênica em folículos transfectados e cultivados tenha sido menor que a de folículos</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">antrais obtido in vivo. As taxas de folículos íntegros (t3D6 e t0/3D6) e formação de antro</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">(t0/3D6) foram maiores em folículos transfectados do que a de folículos não</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">transfectados. A taxa de folículos extrusos foi maior nos tratamentos CD6 e t0D6,</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">enquanto que o tratamento t3D6 apresentou maior taxa de crescimento diário. Além</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">disso, folículos dos tratamentos transfectados t3D6 e t0/3D6 apresentaram maior</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">velocidade de crescimento folicular. Em conclusão, esse trabalho mostrou que é</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">possível transfectar com sucesso, folículos secundários ovinos usando a técnica de</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">siRNA e que essa técnica reduz a taxa de formação do antro em folículos secundários</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">cultivados in vitro. Essa é maius uma evidência de que a AQP3 tem participação na</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">formação da cavidade antral.</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Palavras-chave: Aquaporina. Knockdown. Folículos ovarianos. Antro.</span></font></div>