CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS PRÉ-ANTRAIS EQUINOS INCLUSOS EM TECIDO OVARIANO: BENEFÍCIOS DA SUPLEMENTAÇÃO CONCENTRAÇÃODEPENDENTE DA INSULINA, HORMÔNIO FOLÍCULO ESTIMULANTE E FATOR DE CRESCIMENTO EPIDERMAL

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: AGUIAR, FRANCISCO LÉO NASCIMENTO DE
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Medicina veterinária
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=82219

<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O principal objetivo desta tese foi estudar o efeito concentração-dependente dos hormônios&nbsp;</span></font><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">insulina, hormônio folículo estimulante (FSH), bem como do fator de crescimento epidermal&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">(EGF) no cultivo in vitro (CIV) de folículos pré-antrais equinos inclusos em tecido ovariano,&nbsp;</span><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">avaliando os parâmetros morfologia e desenvolvimento folicular, produção hormonal (todas&nbsp;</span></font><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">as fases), espécies reativas de oxigênio (ROS) (Fases I, II, III), perfil metabolômico (Fase III),&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">níveis de apoptose, expressão proteíca para Ki-67 e para o receptor de EGF, bem como níveis&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">de mRNA para GDF-9, BMP-15 e Cyclin-D2 (Fase IV). Para isso, fragmentos ovarianos&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">equinos foram cultivados em 4 diferentes condições: CIV utilizando meio de base (&#945;-MEM+)&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">na ausência ou presença de suplementação com insulina em concentração fisiológica (10&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">ng/mL) ou suprafisiológica (10 &#956;g/mL) (Fase I); CIV em meio de base suplementado com&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">diferentes concentrações (0, 10, 50 e 100 ng/mL) de FSH (Fase II) ou EGF (Fase III); e CIV&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">usando um meio de base (&#945;-MEM+) enriquecido com insulina (10 ng/mL) e EGF (50 ng/mL),&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">na ausência ou presença de FSH (50 ng/mL) (Fase IV). A duração do cultivo foi de até 7 dias&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">(Fases I, II e III) e de 15 dias (Fase IV). Na Fase I, observou-se que a concentração fisiológica&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">de insulina (10 ng/mL) apresentou maiores (P &lt; 0,05) percentagens de folículos&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">morfologicamente normais e em desenvolvimento quando comparado aos demais tratamentos,&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">após 7 dias de cultivo. Independente do período de cultivo, a produção de ROS foi menor (P &lt;&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">0,05) no tratamento 10 ng/mL de insulina. O hormônio folículo estimulante na concentração&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">de 50 ng/mL apresentou maior (P &lt; 0,05) percentagem de folículos morfologicamente</span></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">normais e em desenvolvimento, bem como maior diâmetro folicular do que os demais&nbsp;</span></font><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">tratamentos após 7 dias de cultivo (Fase II). Adicionalmente, esta concentração de FSH&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">manteve (P &gt; 0,05) a produção de estradiol e de ROS ao longo do cultivo. De maneira geral, o&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">uso de EGF na concentração de 50 ng/mL resultou em maior (P &lt; 0,05) percentagem de&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">folículos morfologicamente normais e em desenvolvimento, bem como maiores (P &lt; 0,05)&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">diâmetros folicular e oocitário após 7 dias de cultivo (Fase III). Além disso, a referida&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">concentração de EGF manteve a produção de ROS ao longo do cultivo. A análise do perfil&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">metabolômico do meio de cultivo após 7 dias revelou a presença de três substâncias (Dinex,&nbsp;</span><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Leonuriside A e Avobenzene) com potencial efeito negativo na sobrevivência, bem como&nbsp;</span></font><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">sobre o diâmetro folicular e oocitário. Finalmente, independente da suplementação com FSH,&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">o uso de um meio enriquecido contendo concentrações apropriadas de insulina e EGF&nbsp;</span><span style="font-size: 13.3333px; font-family: Arial, Verdana;">manteve os níveis de apoptose do tecido ovariano cultivado similares ao controle fresco não&nbsp;</span><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">cultivado após 15 dias de cultivo (Fase IV). A expressão proteíca para EGFR, Ki-67 e os&nbsp;</span></font>níveis de RNAm para GDF-9 e Cyclin-D2 não diferiram entre os grupos tratados após 15 dias. Concluiu-se assim que: as concentrações de insulina (10 ng/mL), FSH (50 ng/mL) e EGF (50 ng/mL) são benéficas ao CIV FOPAs equinos inclusos em tecido ovariano por até 7 dias; e que um meio enriquecido contendo insulina e EGF manteve a morfologia e funcionalidade do tecido ovariano equino após 15 dias de cultivo, independente da adição de FSH.</div><div>Palavras - chave: Folículo pré-antral. Tecido Ovariano Equino. Insulina. FSH. EGF. Cultivo in vitro.</div>