Aperfeiçoamento de técnicas sorológicas para detecção precoce da dengue

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Oliveira, Danielle Ferreira de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
• Palavras-chave em Português: Biotecnologia; Dengue; Imunodiagnóstico
• Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=106878

<div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">O vírus Dengue (DENV) é um patógeno considerado um sério problema de saúde pública no mundo. Compreende quatro sorotipos e codifica dez proteínas, dentre essas proteínas destacam-se NS1 e E, importantes na patogênese da doença, replicação viral e ligação à célula hospedeira, com potencial para utilização no diagnóstico da Dengue. Este estudo teve por objetivo analisar as proteínas recombinantes correspondentes à NS1 e o domínio III da proteína E do DENV2 expressas em plataforma bacteriana, com potencial utilização em kit de diagnóstico. Para tanto, os soros de pacientes suspeitos de Dengue foram utilizados para infectar células de A. albopictus, clone C6/36, e o RNA viral do vírus contido no sobrenadante da cultura infectada foi amplificado por RT-PCR. Os RNAs foram submetidos a uma nova RT-PCR utilizando os primers para regiões que codificam NS1 e EDIII, os insertos foram clonados no vetor pET28a e transformados em E. coli cepa BL21(DE3). Foram avaliadas as cinéticas de produção das proteínas recombinantes produzidas em três diferentes concentrações de IPTG (0,1; 0,5; 1,0 mM). A resposta imunológica humoral foi induzida em camundongos Balb/c imunizados com as doses de 10, 20 e 30 &#61549;g das proteínas recombinantes NS1 e EDIII, sendo avaliadas por ELISA indireto. Foi analisado o reconhecimento das proteínas produzidas em soros de pacientes com suspeita clínica de Dengue. Os resultados obtidos mostram elevados rendimentos na expressão das proteínas NS1 e EDIII, 88 mg/L e 290 mg/L, respectivamente. As proteínas recombinantes mostraram seu potencial imunogênico, induzindo síntese de anticorpos específicos Anti-NS1 e Anti-EDIII. Os anticorpos reconheceram especificamente as proteínas recombinantes e foram reconhecidas pelos anticorpos específicos (Anti-DENV) do soro de pacientes que tiveram a doença. A NS1 foi reconhecida em 81% dos soros de pacientes, resultado foi superior quando comparados ao encontrados para o kit comercial Panbio Diagnóstico (68%), enquanto que, a EDIII foi reconhecida em apenas 57% dos soros. Ambas as proteínas mostraram-se imunogênicas, induzindo a produção de diferentes isótipos de anticorpos específicos IgG, IgG1 e IgG2a, induzindo resposta primária e secundária quando comparadas com o grupo controle. Pode-se observar um aumento dos níveis de imunoglobulinas da resposta primária para resposta secundária. No entanto, na resposta secundária, houve uma elevação no pico de IgG1 e uma diminuição no título de IgG2a, sugerindo um viés de linfócitos Th1 para Th2. Estes resultados sugerem que as proteínas NS1 e EDIII podem induzir respostas imunes celular e humoral, mesmo em baixas concentrações de antígenos. Desta forma, os resultados mostram que as proteínas recombinantes NS1 e EDIII do DENV2 expressas em E. coli induziram resposta imunológica em camundongos Balb/c e foram especificamente reconhecidas por anticorpos de pacientes previamente infectados com DENV, sugerindo sua utilização em kit de diagnóstico.</span></font></div><div style=""><font face="Arial, Verdana"><span style="font-size: 13.3333px;">Palavras-chave: Dengue. NS1. EDIII. Resposta imune. Imunodiagnóstico.</span></font></div>