Desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos na presença de kit ligand (KL) e proteína morfogenética óssea 15 (BMP-15)

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2012
Autor(a) principal: Lima, Isadora Machado Teixeira
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Estadual do Ceará
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: https://siduece.uece.br/siduece/trabalhoAcademicoPublico.jsf?id=72042
Resumo: <div><span style="mso-spacerun:'yes';font-size:12pt;font-family:Times New Roman;color:rgb(0,0,0);">Esse estudo teve como objetivos: 1) quantificar os níveis de RNAm para os receptores de kit&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">ligand (KL) e proteína morfogenética óssea 15 (BMP-15) em folículos ovarianos caprinos&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">utilizando RT-PCR em tempo real; 2) investigar o papel do KL, associado ou não ao&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">hormônio folículo estimulante (FSH) em meio dinâmico, sobre a sobrevivência, ativação e&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">crescimento de folículos pré-antrais caprinos cultivados </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-style: italic;">in situ</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">; 3) avaliar os efeitos do KL e&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">da BMP-15 sobre a sobrevivência, formação de antro e crescimento </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-style: italic;">in vitro </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">de folículos&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">secundários caprinos isolados, bem como sobre a retomada da meiose de seus oócitos. Para o&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">cultivo </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-style: italic;">in situ</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">, fragmentos ovarianos foram cultivados por 16 dias em meio &#945;-MEM</span><span style="font-size: 7.92pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;"><sup>+</sup>&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">contendo KL (50 ng/mL) e/ou FSH (50 ng/mL) dos dias 0 a 8 e/ou 8 a 16 de cultivo. Antes e&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">após o cultivo, os fragmentos foram analisados por histologia, microscopia eletrônica de&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">transmissão e microscopia de fluorescência, sendo os folículos mensurados e classificados em&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">primordiais, transição, primários e secundários, bem como em normais ou atrésicos. Quanto&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">ao cultivo de folículos isolados, folículos secundários foram microdissecados e cultivados por&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">18 dias em &#945;-MEM</span><span style="font-size: 7.92pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;"><sup>+</sup> </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">suplementado ou não com diferentes concentrações de BMP-15 (10, 50&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">ou 100 ng/mL) ou KL (50 ou 100 ng/mL), sendo este último fator testado na ausência ou&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">presença de FSH. Após o cultivo, os oócitos foram destinados à maturação </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-style: italic;">in vitro </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">e&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">posteriormente avaliados quanto à viabilidade e retomada da meiose. Os resultados da RT-</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">PCR mostraram que, com a progressão de folículos primários para secundários, houve uma&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">redução nos níveis de RNAm para o receptor do KL (c-kit) e para um receptor da BMP-15&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">(BMPRII). Além disso, maiores níveis de RNAm foram observados para c-kit nos complexos&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-style: italic;">cumulus</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">-oócito de pequenos e grandes folículos antrais em comparação às suas respectivas&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">células da granulosa/teca, ocorrendo o mesmo para o BMPRII nos grandes folículos antrais.&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">Verificou-se ainda níveis maiores de RNAm para o receptor tipo I da BMP-15 (BMPRIB) nas&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">células da granulosa/teca de grandes folículos antrais em comparação àquelas de pequenos&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">antrais. Após 16 dias de cultivo </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-style: italic;">in situ</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">, observou-se que o meio dinâmico contendo KL até o&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">dia 8 e FSH do dia 8 ao dia 16 manteve a integridade ultraestrutural e induziu a ativação e o&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">crescimento folicular. Quanto aos folículos isolados, a adição de 50 e/ou 100 ng/mL de KL ao&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">cultivo, na ausência de FSH, promoveu a sobrevivência e melhorou a formação de antro,&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">crescimento oocitário e retomada da meiose após 18 dias. Já 50 ng/mL de BMP-15 manteve a&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">ultraestrutura e estimulou a formação de antro e o crescimento de folículos isolados. Em&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">conclusão, os resultados deste estudo mostraram que os RNAm para c-kit, BMPRIB e&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">BMPRII foram detectados em todas as categorias foliculares e tipos celulares investigados. A&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">utilização de KL e FSH de forma dinâmica em cultivo </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-style: italic;">in situ</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">, bem como de KL (50 e/ou 100&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">ng/mL) e BMP-15 (50 ng/mL) em cultivo de folículos secundários isolados, promoveu a&nbsp;</span><span style="font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-size: 12pt;">manutenção da sobrevivência folicular e o desenvolvimento de folículos pré-antrais caprinos.&nbsp;</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">Palavras-chave: KL. BMP-15. Folículos pré-antrais. Cultivo </span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;; font-style: italic;">in vitro</span><span style="font-size: 12pt; font-family: &quot;Times New Roman&quot;;">. Caprinos.</span></div>