Evolução in vitro do vírus Zika

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Pessoa, Karina Pinheiro
• Orientador(a): Naveca, Felipe Gomes
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/41048

O vírus Zika (ZIKV) é um arbovírus da família Flaviviridae gênero Flavivirus com genoma composto por uma fita única de RNA de polaridade positiva. Assim como os demais vírus RNA, exibe variações em suas sequências, o que ocorre devido a fatores, como por exemplo, a falta de atividade de correção da polimerase viral e a alta taxa de replicação. Considerando que a ocorrência de mutações é um evento que pode levar a seleção de variantes virais com fitness alterado, este trabalho teve como objetivo avaliar a evolução in vitro do vírus Zika, analisando as mutações ocorridas durante o processo de adaptação em cultura células, associadas ao aumento ou diminuição da competência viral (viral fitness). Uma amostra positiva para ZIKV denominada 0305JFMB, foi isolada em células de Aedes albopictus C6/36, e utilizada para processo de adaptação em cultura de células C6/36, sendo realizadas 33 passagens em replicatas. Finalizadas as passagens, foi realizada a extração do RNA viral e o cDNA foi produzido utilizando iniciadores randômicos. O genoma completo da amostra 0305JFMB direto do plasma e das passagens P1, P33.1, P33.2, foi obtido pelo método Sanger utilizando sequenciador automático ABI 3130. Os dados do sequenciamento foram analisados utilizando o software Geneious, e mostrou que no decorrer das passagens ocorreram 7 mutações nas regiões que codificam para as proteínas não estruturais: uma mutação sinônima em NS1; uma mutação sinônima em NS2A; uma mutação sinônima em NS3; 4 mutações não sinônimas, duas na região que codifica para proteína NS3 e duas mutações na região que codifica para NS5. Para avaliar o impacto das mutações observadas sobre a competência viral, as passagens P1 e P33 foram tituladas através de um ensaio de RT-qPCR utilizando o método ΔΔCt, realizado em triplicatas técnicas. Posteriormente foram realizados os ensaios para avaliação da competência viral in vitro (C6/36) e in vivo (Aedes aegypti). Em C6/36 foi avaliado o número de cópias de RNA viral presente tanto no sobrenadante de células infectadas quanto no interior das células. Os resultados mostraram um aumento significativo do número de cópias de RNA viral nas células infectadas com P33 no período de 72 horas pós infecção. A carga viral avaliada nos tempos (8 e 12 dias) no experimento in vivo em Aedes aegypti em ambos os tempos a carga viral relativa de P33 foi inferior à de P1. Nossos resultados sugerem que novos estudos devem ser realizados para confirmar os impactos das mutações observadas em outros sistemas biológicos in vivo e in vitro, visto que as proteínas de ZIKV podem influenciar a forma que os componentes virais interagem com a célula hospedeira e, assim, podem modular sua infectividade em diferentes substratos celulares.