Quantificação da carga parasitária em amostras coletadas de borda interna e externa de lesões cutâneas ulceradas de pacientes com leishmaniose tegumentar americana

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Silva, Caio Thomaz de Lima e
• Orientador(a): Marzochi, Mauro Célio de Almeida, Mello, Cintia Xavier de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/51184

As leishmanioses constituem um grupo de doenças infecciosas de transmissão vetorial, causadas por protozoários do gênero Leishmania que acometem o ser humano e animais. No Brasil, a leishmaniose cutânea (LC) é uma doença com registro de casos e de vetores em todo território nacional. A úlcera típica da leishmaniose cutânea é arredondada, indolor, base infiltrada e endurecida, bordas bem delimitadas e elevadas, variando de uma a poucas lesões na maioria dos casos. A pesquisa direta de formas amastigotas, com o auxílio da microscopia ótica, é o método mais simples e tradicional utilizado no diagnóstico da doença. Consiste em pesquisar o parasito em material obtido de escarificação da borda das lesões, sem a necessidade de anestesia local. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) vem alcançando cada vez mais aplicabilidade no campo do diagnóstico das leishmanioses, principalmente por sua alta sensibilidade, superando os métodos diretos. O exame histopatológico, apesar da baixa sensibilidade para o diagnóstico da LC, é útil no diagnóstico diferencial, além de permitir estudar os tipos e a distribuição de células na lesão. Segundo as recomendações da Organização Mundial de Saúde, o local de eleição para coleta de material para diagnóstico da LC é a borda da lesão, pois supõe-se que essa localização contenha a maior quantidade de parasitos. Entretanto, alguns autores têm observado uma maior carga parasitária na borda interna da lesão quando comparado com a borda externa. No Brasil, o Ministério da Saúde recomenda a borda interna. Este estudo tem como objetivo avaliar comparativamente a carga parasitária e o perfil histopatológico na borda interna e externa de lesões cutâneas ulceradas de LC. Para avaliar a diferença quantitativa nas duas localizações, foi utilizada a PCR quantitativa (qPCR) O DNA foi extraído de material de lâminas coletadas previamente, fixadas com metanol e coradas com Giemsa. A quantificação das amostras foi realizada pela qPCR utilizando o sistema SYBR Green com primers direcionados ao minicírculo do kDNA de Leishmania (Viannia) braziliensis e gen \03B2-actina. Foram recuperados blocos de parafina de 19 pacientes, dos quais foram preparadas lâminas coradas pela hematoxilina-eosina para avaliação semi quantitativa dos tipos celulares presentes em cada um dos locais da lesão. Foram analisadas lâminas confeccionadas com material proveniente de escarificação das bordas interna e externa, imprint e histopatologia, totalizando 156 lâminas provenientes, respectivamente, de 39 pacientes diagnosticados com LC. Tanto pela qPCR, quanto pelo exame direto foi possível observar maior carga parasitária na borda interna da lesão em relação à borda externa e imprint. Pela análise histopatológica também foi encontrado um maior índice parasitário na borda interna da lesão. Apesar da menor quantidade de parasitos por lâmina, o imprint permitiu o diagnóstico em 27 pacientes, comparado com 23 diagnósticos na borda interna. Talvez, a menor quantidade de artefatos nas lâminas de imprint facilite a visualização das formas amastigotas. Entretanto, o uso da escarificação na rotina de diagnóstico apresenta vantagens, por ser uma técnica simples, pouco invasiva, que não requer anestesia e que pode ser realizada repetidas vezes, por profissional não médico, em áreas endêmicas. Portanto, os resultados sugerem que a escarificação da borda interna da lesão seja o método indicado para coleta de amostras com fins de diagnóstico molecular e exame direto