Efeitos da leptina na adipogênese e produção de mediadores inflamatórios por adipócitos 3T3-L1

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Amaral, Lohanna Palhinha do
• Orientador(a): Monteiro, Clarissa Menezes Maya
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/26452

A leptina é uma adipocina essencial na modulação do balanço energético e peso corporal através da sua sinalização no hipotálamo, pela qual inibe a ingesta alimentar e induz o gasto energético. Além disso, a leptina tem efeitos periféricos importantes, que incluem a ativação de células do sistema imune e indução da formação de gotas lipídicas nessas células. Centralmente os efeitos lipolíticos da leptina no tecido adiposo são bastante definidos e perifericamente a leptina induz a formação de gotas lipídicas em vários tipos celulares. Contudo, as modificações induzidas pela leptina localmente nos adipócitos e sua influência na adipogênese não são totalmente esclarecidas na literatura. Estes efeitos locais da leptina são importantes na obesidade, onde existe resistência central à sinalização desta adipocina e provavelmente seus efeitos periféricos prevalecem. Nosso objetivo foi avaliar os efeitos da exposição dos adipócitos à leptina exógena in vitro na regulação da adipogênese e da liberação de mediadores inflamatórios. Para isso, nós diferenciamos a linhagem murina de pré-adipócitos 3T3-L1 na presença ou ausência de leptina, avaliando por Western Blot, ELISA/EIA e microscopia de fluorescência as células na fase não-diferenciada (pré-adipócitos) e em três fases da diferenciação dos adipócitos. Durante a adipogênese em células controle, nós observamos uma diminuição na expressão de ADRP/PLIN2 e um aumento de Perilipina/PLIN1, o que foi anteriormente associado ao crescimento das gotas lipídicas. Quando as células foram diferenciadas na presença de leptina, a redução de PLIN2 e aumento de PLIN1 foram antecipados, sugerindo a predominância de gotas lipídicas grandes, como demonstrado pelas nossas imagens de microscopia Também observamos que o tratamento com leptina induziu um aumento na expressão dos fatores pró-adipogênicos PPAR\03B3 e SREBP-1c e de caveolina-1, proteína essencial para a formação de gotas lipídicas. Nós também investigamos a via de síntese de eicosanóides, sabidamente importante para a inflamação e adipogênese. Observamos uma diminuição na expressão de COX-1 e -2 e que este efeito foi potencializado pelo tratamento com leptina. Avaliamos dois dos produtos de COXs, as prostaglandinas D2 e E2, associadas à indução e inibição da adipogênese, respectivamente. Observamos que, em células controle, a PGD2 aumenta na primeira fase da diferenciação e é reduzida progressivamente ao longo da adipogênese, enquanto PGE2 é reduzida na primeira fase e mantida em níveis baixos. O tratamento com leptina manteve a secreção de PGD2 em níveis altos até as fases finais da diferenciação e não alterou PGE2, indicando que a leptina modifica o balanço de eicosanóides em células 3T3-L1, favorecendo a adipogênese. A citocina pró-inflamatória TNF-\03B1 teve sua expressão e secreção aumentadas ao longo da diferenciação, e o tratamento com leptina levou a uma antecipação deste aumento. Também demonstramos que a leptina é capaz de sinalizar através de seu receptor LepRb em adipócitos 3T3-L1, ativando as vias de PI3K/AKT/mTOR e JAK2/STAT3. Concluímos que a leptina antecipa o padrão de expressão e secreção de proteínas relacionadas à adipogênese e à inflamação que seria observado apenas nas fases finais da diferenciação em células controle. Em resumo, mostramos que na ausência de seus efeitos centrais, a leptina se comporta como um fator pró-adipogênico. Estes dados contribuem para o entendimento da ação metabólica da leptina e possivelmente para futuras terapias para a obesidade.