Otimização da metodologia de preservação e caracterização da espécie Saccharomyces kudriavzevii para a produção de material de referência certificado

• Ano de defesa: 2022
• Autor(a) principal: Santos, Carolina dos
• Orientador(a): Villas Bôas, Maria Helena Simões, Vieira, Verônica Viana, Nascimento, Carlos Roberto Sobrinho de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60077

A utilização de um Material de Referência Cerificado (MRC) visa garantir a confiabilidade e a validade dos resultados de um laboratório, pois é um material caracterizado por um procedimento metrologicamente válido para uma ou mais propriedades especificadas, acompanhado de um certificado que fornece o valor de propriedade, sua incerteza associada e uma declaração de rastreabilidade metrológica. Atualmente, no Brasil, não existem produtores acreditados de MRC de fungos e, como a aquisição depende de produtores internacionais, as dificuldades encontradas são devido ao alto custo de importação, além das barreiras sanitárias e comerciais. O desafio da produção de um MRC microbiológico é a sua instabilidade natural. A levedura Saccharomyces kudriavzevii é preconizada em testes de controle de qualidade em compêndios oficiais, além de ser estudada em vários campos da ciência e tecnologia. O objetivo deste trabalho foi otimizar a metodologia de preservação e caracterização inequívoca de S. kudriavzevii frente a outras espécies do gênero Saccharomyces para o estabelecimento dessa levedura como MRC, seguindo a norma ABNT NBR ISO/IEC 17034:2017. Foram produzidos três lotes com crioprotetores diferentes: Skim Milk 20% + trealose 10%, Skim Milk 20% e Skim Milk 20% + maltose 10%, e avaliados quanto a sua homogeneidade e a estabilidade em longo e a curto prazo. Todos os três lotes foram considerados suficientemente homogêneos. Para a estabilidade em longo prazo os três lotes apresentaram prazo de validade de 12 meses. No teste de estabilidade a curto prazo o lote Skim Milk 20%, nas temperaturas de 4 °C e 35 °C, não foi considerado suficientemente estável. Já os lotes Skim Milk 20% + trealose 10% e Skim Milk 20% + maltose 10% apresentaram estabilidade apenas na temperatura de 4 °C. O lote selecionado para o estabelecimento do MRC da levedura S. kudriavzevii foi o produzido em Skim Milk 20% + maltose 10%. Na caraterização do MRC foram utilizadas técnicas fenotípicas e genotípicas, a fim de se ter uma caracterização da levedura S. kudriavzevii. As técnicas fenotípicas não foram suficientes para a diferenciação e identificação da levedura. A técnica genotípica de análise por HRM foi capaz de diferenciar as espécies estudadas e assim, identificar a levedura S. kudriavzevii, sendo assim, a técnica escolhida para a identificação do MRC. Foi elaborado um certificado que acompanha o MRC com todas as informações preconizadas na norma ABNT NBR ISO/IEC 17034:2017, além das orientações dos guias ABNT ISO GUIA 31 e ABNT ISO GUIA 35. O estudo poderá colaborar com o aprimoramento da qualidade de produtos, atendendo as exigências do controle da qualidade, assim como, o desenvolvimento tecnológico da Fiocruz