Estudo do papel dos corpúsculos lipídicos durante a infecção de células dendríticas humanas pelo Toxoplasma gondii

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Oliveira, Karina da Silva
• Orientador(a): Bozza, Patricia Torres
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/37731

O Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório, capaz de infectar vários tipos de células nucleadas, sendo compartimentalizado no vacúolo parasitóforo. Uma vez no vacúolo, o parasita é capaz de induzir diversas alterações na célula hospedeira que visam sua sobrevivência, dentre elas, a indução da biogênese de corpúsculos lipídicos (CLs). CLs são organelas presentes em todos os tipos celulares, com várias funções como, armazenamento de lipídios, regulação do metabolismo lipídico, tráfego de membranas e controle da síntese e secreção de mediadores inflamatórios. Porém, até o momento, pouco se sabe a respeito da função dos CLs na infecção pelo T. gondii em células humanas. Neste trabalho investigamos a participação dos CLs durante a infecção de células dendríticas humanas (hDC) por T. gondii. Nossos dados mostraram na cinética de infecção em hDC, pico de infecção e replicação em 24 horas (30%), seguidos de queda em 48 horas (10%). A infecção promoveu aumento de CD83 e MHC II na membrana, além da produção de TNF-\03B1, IL-6, IL-8, IP-10 e MIF. A análise da viabilidade do parasita intracelular mostrou que as hDC foram capazes de destruir os parasitos intracelulares (60%). A infecção levou à perda da viabilidade da célula hospedeira em 48 horas de infecção (50%), ao mesmo tempo em que induziu a maior biogênese de CLs nessas células (30CL/cél) O aumento da taxa de infecção fez com que a biogênese de CLs e a perda da viabilidade das células hospedeiras ocorressem de forma mais precoce, já em 24 horas de infecção. Os tratamentos com o inibidor (C75) da enzima ácido graxo sintase (FAS) ou inibidor (A922500) da enzima diacilglicerol aciltransferase 1 (DGAT1) foram capazes de reduzir a biogênese de CLs (3 CL/cél) e diminuíram também o percentual de células infectadas e a taxa de replicação do parasito, fazendo com que ela ocorresse de forma mais lenta. O mesmo fenômeno pôde ser visto quando as células foram cultivadas em soro fetal bovino delipidado. Além disso, os tratamentos se mostraram protetivos para as células hospedeiras durante a infecção, mantendo sua viabilidade (~80%). O tratamento com o inibidor da DGAT1 ainda reduziu a presença de MHC I na membrana. A suplementação com ácido oleico em células tratadas com o inibdor da DGAT1, recuperou a taxa de infecção e, de forma parcial, auxiliou na replicação do parasita frente à ausência dos CLs. Em conclusão, nossos dados sugerem que os CLs possuem funções tanto como fonte de nutrientes para o T. gondii, quanto na modulação da resposta imune da hDC.