Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2009 |
| Autor(a) principal: |
Guimarães, Georgia de Freitas |
| Orientador(a): |
Gil, Laura Helena Vega Gonzales |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Não Informado pela instituição
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Link de acesso: |
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/61063
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Resumo: |
Diversas estratégias vacinais contra a dengue tem sido testadas, mas sem sucesso. A vacina de DNA é uma tecnologia recente, onde um ou mais plasmídeos recombinantes contendo o(s) gene(s) desejado(s) é inoculado. Porém uma das principais desvantagens das vacinas de DNA é a baixa imunogenicidade. A fusão do gene que codifica antígeno com o gene que codifica a proteína LAMP (Lysosome-Associated Membrane Protein), que direciona o antígeno para o lisossomo, resultam numa melhor resposta imunológica devido a apresentação dos antígenos aos linfócitos T helper CD4+ por moléculas do Complexo Principal de Histocompatibilidade de classe II (MHC II), gerando deste modo uma maior atividade proliferativa de linfócitos antígeno-específicos, altos títulos de anticorpos e intensa atividade T- citotóxica. É possível, também, otimizar os códons da sequência gênica do antígeno, resultando em uma maximização da expressão gênica e consequentemente uma melhor resposta imunológica. As proteínas pré-membrana e envelope do sorotipo 3 do vírus dengue foram clonadas no vetor p43HIVhumanLAMP/Gag, na forma selvagem e otimizada, resultando nos plasmídeos p43- DENV3-prM/E e p43-DENV3-prM/E-LAMP, p43-DENV3-prM/E-opt e p43-DENV3- prM/E-opt-LAMP. Neste estudo foram analisados a expressão e o tráfego das proteínas clonadas em células HEK-293. Foi possível observar a expressão das proteínas clonadas por imunofluorescência, mas não por Western-blot. Nos estudos de tráfego celular por microscopia confocal observou-se a localização lisossomal das proteínas prM/E fusionadas com a porção c-terminal de LAMP, e uma distribuição perinuclear das proteínas não fusionadas com LAMP. Os resultados obtidos neste projeto representam uma etapa inicial para o desenvolvimento futuro de uma vacina de DNA tetravalente contra o vírus da dengue. |
