Estabelecimento de fungos como materiais de referência certificados e seleção de métodos de excelência para caracterização das diferentes espécies

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Souto, Aline da Silva Soares
• Orientador(a): Silva, Manuela da, Villas Bôas, Maria Helena Simões
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60080

A utilização de Material de Referência Certificado (MRC) é fundamental para os laboratórios que desejam obter resultados confiáveis, já que seus valores de propriedade são bem definidos, garantindo assim a rastreabilidade de determinados parâmetros em diferentes áreas. A aquisição de MRC biológico pelos laboratórios brasileiros tem sido dificultada devido à inexistência destes materiais no mercado nacional, bem como os altos custos relacionados à importação. A produção de MRC destinados a ensaios microbiológicos é complexa, já que há a instabilidade natural dos micro-organismos. O apoio ao desenvolvimento desses materiais por coleções de culturas estabelecidas como Centro de Recursos Biológicos é de fundamental importância para o Brasil, a fim de permitir que atividades de controle de qualidade de produtos ou em análises clínicas, cujas exigências por MRC têm sido cada vez maiores por parte dos órgãos fiscalizadores, se tornem mais ágeis, eficientes e menos onerosos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver metodologia para a produção de quatro leveduras como MRC, Cryptococcus neoformans, C. gattii, Candida albicans e Saccharomyces cerevisiae, seguindo os requisitos da ABNT NBR ISO/IEC 17034:2017. Os estudos de homogeneidade, estabilidade em longo prazo, estabilidade em curto prazo, bem como as avaliações estatísticas foram realizados. Os lotes de C. neoformans CFRVS MRC 40323, C. gattii CFRVS MRC 40324 e C. albicans CFRVS MRC 40006 se apresentaram homogêneos e foram estáveis por um ano. Além disso, esses materiais se apresentaram estáveis a 4 ºC, 25 ºC e 35 ºC, temperaturas que simulam condições de transporte. A fim de eleger a técnica mais rápida e eficiente para caracterização taxonômica dos materiais, foi realizado um estudo com espécies representantes dos gêneros envolvidos na produção dos MRC deste trabalho, em que diferentes métodos de identificação foram aplicados. Para C. neoformans CFRVS MRC 40323 e C. gattii CFRVS MRC 40324, as técnicas eleitas para a caracterização fenotípica foram a observação da síntese de melanina, utilizando ágar Semente de Niger, juntamente com o teste em meio CGB, já para a genotípica foi a técnica molecular RFLP-URA5. Para o material C. albicans CFRVS MRC 40006, a caracterização fenotípica foi realizada utilizando meio Chromoagar e o método automatizado VITEK 2, já para a genotípica, a técnica indicada foi o sequenciamento da região ITS. Para C. neoformans CFRVS MRC 40323, C. gattii CFRVS MRC 40324 e C. albicans CFRVS MRC 40006 foram elaborados certificados cujo conteúdo segue as orientações do ABNT ISO Guia 31:2017, e em que constam os valores de propriedade certificados atribuídos a cada MRC, bem como suas incertezas associadas. Não foi possível a certificação de S. cerevisiae CFRVS 40001, já que não foi selecionado um método inequívoco para a caracterização taxonômica desta espécie. Este estudo contribuirá para o desenvolvimento e inovação tecnológica na área da produção industrial brasileira e para a saúde pública.