Detalhes bibliográficos
| Ano de defesa: |
2009 |
| Autor(a) principal: |
Ribeiro, Daniel André |
| Orientador(a): |
Castilho, Leda dos Reis,
Ferraz, Helen Conceição |
| Banca de defesa: |
Não Informado pela instituição |
| Tipo de documento: |
Dissertação
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| Tipo de acesso: |
Acesso aberto |
| Idioma: |
por |
| Instituição de defesa: |
Não Informado pela instituição
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| Programa de Pós-Graduação: |
Não Informado pela instituição
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| Departamento: |
Não Informado pela instituição
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| País: |
Não Informado pela instituição
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| Link de acesso: |
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60762
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Resumo: |
Neste trabalho o gene do fator IX, proteína utilizada no tratamento da hemofilia B, foi co-expresso com os genes das enzimas γ-carboxilase, VKORC1 e PACE, responsáveis pelas modificações pós-tradução da molécula do fator IX, em células CHO. Estas modificações são imprescindíveis para a atividade biológica do fator IX. Foram construídos vetores bicistrônicos com o elemento IRES defectivo intermediando os dois genes, com os cDNAs do fator IX e das enzimas. A expressão gênica, a produção do fator IX total e a atividade do fator IX foram avaliadas em células CHO transfectadas com o vetor pIRES, de integração aleatória, e com o vetor pcDNA5/FRT, de integração sítio-dirigida. O nível de expressão e produção de fator IX em células transfectadas com o vetor pIRES foi baixo em relação ao obtido para o pcDNA5/FRT. Isto comprovou a superioridade do sistema de integração sítio-dirigida em relação à integração aleatória. Como a expressão utilizando o vetor pIRES foi baixa, praticamente não houve influência da co-expressão das enzimas. Já com o pCDNA5/FRT, a coexpressão da γ-carboxilase prejudicou a produção de fator IX funcional, provavelmente pela reduzida oferta de co-fator desta enzima, a vitamina K reduzida. |
