Caracterização molecular de histoplasma capsulatum isolados no Brasil

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: Muniz, Mauro de Medeiros
• Orientador(a): Zancopé-Oliveira, Rosely Maria
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/27779

Para estabelecer a relação genética entre isolados de Histoplasma capsulatum brasileiros obtidos de diferentes fontes, um ensaio de reação em cadeia de polimerase utilizando primers arbitrários (PCR-RAPD) foi usado para delinear o polimorfismo entre os isolados de diversas regiões geográficas do Brasil e o RAPD fingerprinting revelou distintos perfis genotípicos promovendo um alto nível de discriminação entre cepas de H. capsulatum de diferentes localidades. Este estudo foi pioneiro na estratificação de isolados de H. capsulatum do Brasil através da tipagem molecular e associação com a sua origem geográfica. Múltiplos métodos de tipagem foram desenvolvidos para estudo epidemiológico de H. capsulatum, porém as informações são limitadas quando comparados os resultados obtidos por metodologias diferentes usando o mesmo grupo de isolados. Para explorar a diversidade de H. capsulatum no Brasil e determinar a correlação entre três técnicas de tipagem molecular diferentes, examinamos 51 isolados de origem (ambiental, animal, e humano) por M13 PCR fingerprinting, PCR-RFLP da região ITS1-5.8S-ITS2 e sequenciamento parcial de quatro genes que codificam proteínas (ARF, H ANTI, OLE, TUB) Cada método identificou três agrupamentos genéticos principais com uma alta concordância entre si. Notavelmente, o método de sequenciamento parcial de gene resultou em altos valores de bootstrap sugerindo que o método apresenta grande sensibilidade. Além disso, análise filogenética dos 51 isolados brasileiros com 19 seqüências de H. capsulatum publicadas em bancos de dados de tais genes demonstrou um agrupamento genético singular, exibindo a natureza complexa e diversa do H. capsulatum. Diferentes métodos moleculares promovem informações complementares que podem conduzir a um entendimento mais amplo de epidemiologia molecular Neste trabalho, investigamos a possibilidade de utilização da técnica de qRT-PCR para quantificar a expressão de genes e elucidar a relação dos isolados brasileiros de H. capsulatum que se agruparam por perfis de PCR-RFLP, M13 DNA fingerprinting e por sequenciamento parcial do gene do antígeno H. Portanto, a expressão de seis genes associados à virulência do H. capsulatum e ficou evidenciado que este método permitiu o agrupamento dos isolados altamente relacionados. Além disso, os resultados sugerem que no modelo H. capsulatum, processos de microevoluções possam estar ocorrendo para possivelmente facilitar sua adaptação a seu ambiente local.