Identificação molecular de cepas do complexo Mycobacterium tuberculosis e detecção de resistência a antibióticos

• Ano de defesa: 2006
• Autor(a) principal: Gomes, Harrison Magdinier
• Orientador(a): Suffys, Philip Noel
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/35561

A tuberculose mata aproximadamente 3 milhões de pessoas no mundo a cada ano. A pobreza, a falta de informação, a demora no diagnóstico de cepas resistentes e multi-resistentes e fatores de risco associados à infecção por Mycobacterium tuberculosis são os principais responsáveis pela manutenção de sua transmissão. Em nosso estudo, utilizamos duas abordagens moleculares, baseadas na reação de PCR, \201CSingle Strand Conformational Polymorphism-SSCP\201D e \201CReverse Line Blot Hybridization\201D-RLBH, para verificarmos genótipos mutantes e a freqüência de mutações no genoma de M. tuberculosis associadas à resistência a drogas, assim como avaliarmos a RLBH para a detecção rápida de resistência. Utilizando o SSCP, verificamos que a versão radioativa apresentou uma melhor resolução que a não radioativa. Na versão não-radioativa uma discordância foi observada (9,1%) ao comparar os resultados com a análise por sequenciamento. Na RLBH, uma membrana contendo sondas para detecção de resistência a: rifampicina, isoniazida, estreptomicina e etambutol foi avaliada em um estudo multi-cêntrico e 50% das cepas resistentes a rifampicina apresentavam mutações em rpoB nos códons 531-TTG (43%) e 526-GTC (7%) enquanto que 49% das cepas resistentes a etambutol apresentavam mutações no códon 306-GTG (34%) e ATA (14%) Uma segunda versão da RLBH, para detecção de resistência a rifampicina com sondas específicas para o gene rpoB foi avaliada. Analisamos 50 cepas de Mycobacterium Bovis, sensíveis e 157 cepas de M. tuberculosis sensíveis e resistentes a rifampicina. Todas as cepas de M. bovis apresentaram o genótipo de sensível e entre as cepas resistentes de M. tuberculosis, 93% apresentaram mutações na região de 157pb do gene rpoB. O Inno-LiPA (teste comercial), baseado em RLBH, para detecção de cepas de M. tuberculosis resistente a rifampicina, também foi analisado, apresentando uma sensibilidade de 97,6%.Concluímos que a hibridação reversa tem a sensibilidade adequada para detectar cepas de M. tuberculosis resistentes a rifampicina e que os mecanismos relacionados à resistência a estreptomicina e isoniazida necessitam de uma melhor compreensão. Na parte deste estudo referente à variabilidade genética de cepas brasileiras de M. tuberculosis, avaliamos a composição de uma região especifica do Complexo M. tuberculosis, a \201CDirect repeat\201D (DR), pela técnica de \201Cspoligotyping\201D Através desta técnica determinamos os genótipos de cepas de M. tuberculosis, de pacientes, provenientes de 11 estados brasileiros e os comparamos com \201Cspoligotypes\201D de 122 países depositados no Banco de Dados Internacional de \201Cspoligotypes\201D. 80% das cepas brasileiras pertencem às famílias dos \201Cspoligotypes\201D \201CLatin-American and Mediterranean\201D (LAM; 46,5%), T (19,7%) and Haarlem (13,3 %). 302 \201Cspoligotypes\201D novos estão distribuídos entre todas as famílias. Dentro da família LAM, uma deleção denominada de RDRio de 26 kB foi detectada e esta deleção está relacionada a 30% dos casos de TB na cidade do Rio de Janeiro. A distribuição de cepas de M. tuberculosis no Brasil parece estar relacionada à colonização brasileira e ao moderno fluxo migratório.