Análise in vitro da ação combinada de compostos leishmanicidas

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Melo, Ivana D'Almeida
• Orientador(a): Soeiro, Maria de Nazaré Correia
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/37811

As leishmanioses fazem parte de doenças negligenciadas, por acometer, em sua grande maioria, pessoas de países subdesenvolvidos ou em desenvolvimento, para as quais empresas farmacêuticas tem pouco interesse em financiar o desenvolvimento de novos medicamentos. O tratamento é feito utilizando antimoniais pentavalentes como primeira escolha, pentamidina (Pt), miltefosina (Mt), anfotericina B e sua formulação lipossomal. Todos causam efeitos adversos e exibem crescentes casos de resistência, logo há a necessidade de se desenvolver terapias mais seguras, eficazes e de curta duração. Neste trabalho, primeiramente, foi testada a atividade fenotípica de 18 novos compostos (ftalazinonas e imidazóis - inibidores de fosfodiesterases (PDE), imidazóis inibidores de biossíntese de ergosterol (EBI), além de quinolinas) comparando-os com dois fármacos de referência (Pt e Mt), em esquemas de monoterapia por ensaios sobre amastigotas obtidas de lesões na pata de camundongos inoculados com Leishmania amazonensis, comparando ainda com ação sobre as formas intracelulares presentes em macrófagos infectados in vitro. Dentre esses compostos, 09 não foram ativos, com EC50 > 50 \03BCM. Os mais promissores foram as ftalazinonas e imidazóis inibidores de PDEs (NPD001, NPD008, NPD040, NPD029, NPD3115, NPD3124, NPD3125, NPD3126) e o VNI (EBI), com ação leishmanicida moderada (EC50 entre 10,15 e 44 \03BCM), sendo menos efetivos que Mt e Pt (EC50 4 e 1,5 \03BCM, respectivamente). Ensaios de toxicidade dos melhores compostos sozinhos e em combinação, sobre cultivos de macrófagos revelaram que os compostos sozinhos, têm valores de LC50 > pentamidina (LC50 = 15,2 \03BCM), sendo, portanto, menos tóxicos Porém, quando comparados a miltefosina (LC50 = 157,6 \03BCM), as ftalazinonas e o imidazol NPD3126 foram mais citotóxicos. O índice de seletividade (IS) também foi calculado, e todos os compostos tiveram IS inferior aos dois fármacos. Os compostos mais potentes (NPD001, NPD008, NPD040, NPD3115 e NPD3126) foram selecionados para estudos de combinação com Mt e Pt e também entre si, sendo ainda avaliados em modelos ex vivo. Em todas as combinações, a natureza da interação foi de aditividade ou \201Csem interação\201D, segundo classificação por Odds (2003). Com relação aos ensaios de toxicidade das combinações testadas, houve perda de viabilidade celular (> 56%) somente nas maiores concentrações das proporções estudadas. Por fim, de modo a comparar e validar os dados obtidos, realizamos ensaios in vitro com amastigotas intracelulares de L. amazonensis localizadas em culturas de macrófagos. NPD008, NPD3126 e a Pt exibiram superiores potências leishmanicidas sobre os parasitos intracelulares em comparação às amastigotas livres obtidas de lesão, com os seguintes valores de EC50: pt: 0,35 \03BCM e 1,5 \03BCM; NPD008: 2,38 \03BCM e 10,8 \03BCM e NPD3126: 5,0 \03BCM e 10,15 \03BCM, respectivamente. NPD008 teve o valor de EC50 (2,38 \03BCM) inferior ao da miltefosina (5,0 \03BCM) e melhor IS (17) comparado aos demais compostos testados, e assim, seguiu para os estudos de combinação sobre amastigotas intracelulares de L. amazonensis. A semelhança do observado com amastigotas livres, NPD008 + Pt resultou em perfil de aditividade (x\03A3FICI = 1.39). Nas proporções não tóxicas de 80:20, 60:40 e 40:60 de NPD008 + pt observamos redução da carga parasitária superior a 85 %, alcançando em algumas proporções índices de supressão igual a 98 % e mesmo 100 % de redução no percentual e número de parasitos por célula hospedeira A microscopia eletrônica de varredura revelou que NPD008 + Pt induziu alterações sugestivas de inibição de divisão celular, com grande número de amastigotas duplicadas e não dissociadas, resultando em extensos grumos parasitários, como já reportado para Trypanosoma brucei incubado com inibidores de PDEs. Nosso estudo revela o efeito promissor de inibidores de PDEs sobre Leishmania amazonensis, em especial em esquemas de combinação, que merece ser explorado em futuros ensaios in vivo visando futuro desenvolvimento de novos fármacos para terapia das leishmanioses.