Anticorpos IgY específicos para rotavírus do grupo Auma abordagem terapêutica para rotavirose em Macaca fascicularis

• Ano de defesa: 2015
• Autor(a) principal: Vasconcelos, Gentil Arthur Lins Bentes Mendonça de
• Orientador(a): Pinto, Marcelo Alves
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/13819

A produção de anticorpos em aves imunizadas seguida da extração desses anticorpos da gema dos ovos (IgY), tem atraído o interesse da comunidade científica, como pode ser demonstrado pelo aumento significativo da literatura sobre a IgY. Esta abordagem, que é apropriada à produção em larga escala, oferece inúmeras vantagens, tais como, baixo custo e alta eficiência da técnica, em vista do extraordinário rendimento de IgY em somente uma ave (20-40 g IgY por ano), e é mais adequada ao conceito bioético quando trata-se da manutenção e do manejo das aves. Destaca-se que a tecnologia da IgY oferece novas possibilidades de aplicação em imunoterapia e métodos de diagnóstico, tanto para aplicação humana quanto veterinária, incluindo estratégias de tratamento de doenças intestinais graves em crianças, particularmente em países pobres. Neste presente estudo, objetivou-se avaliar a eficiência terapêutica da IgY utilizando macacos cynomolgus (Macaca fascicularis) jovens desafiados com o rotavírus do grupo A (RVA) humano, a maior causa de morbidade e mortalidade de crianças em todo o mundo, especialmente em países em desenvolvimento. Para esta proposta, anticorpos IgY específicos contra o RVA foram produzidos em aves, purificados por polietileno glicol, caracterizados por eletroforese em gel de poliacrilamida, western blotting e um teste de neutralização em cultura de células (MA-104). Este experimento preliminar rendeu uma suspensão altamente concentrada de IgY específica anti-rotavírus (IgY anti-RVA) (média de 37 mg/mL) O macaco cynomolgus foi estabelecido como modelo de infecção experimental após uma única administração de suspensão de rotavírus humano (3,1x106 FFU/mL) por sonda gástrica. Os animais foram acompanhados durante onze dias, sendo observadas as manifestações clínicas, cargas virais sérica e fecal, hematologia e dosagem de eletrólitos séricos. O principal sinal clínico (observado em dois dos sete animais inoculados) foi diarreia associada com diminuição dos níveis séricos de potássio durante três dias, seguido de recuperação. O RNA viral foi detectado nas fezes e no soro dos animais infectados, além de partículas infecciosas encontradas nas fezes, sugerindo replicação viral. Na imunoterapia experimental, os macacos foram inoculados com RVA humano (3,1x107 FFU/mL), desafiados com a suspensão de IgY anti-RVA obtida previamente, e foram monitorados durante cinco dias pelos parâmetros observados no experimento anterior. A eficiência terapêutica da imunoterapia com IgY foi confirmada pela ausência de episódios de diarreia, que é reconhecida como \201Cpadrão ouro\201D para eficácia clínica, apesar do RNA viral ter sido detectado nas fezes de 11 de 12 animais inoculados com o RVA. A duração da detecção do RNA foi reduzida em dois dos três grupos de animais tratados com IgY, quando comparado ao grupo controle positivo. Em um animal que foi tratado com IgY pelas vias oral e intravenosa, não foi detectado genoma viral nas fezes. Como conclusão, a aplicação de anticorpos IgY anti-RVA específicos produzidos em aves, apresenta eficácia no tratamento de gastroenterite aguda causada pelo rotavírus do grupo A humano Nossos resultados também confirmam que macacos cynomolgus podem ser considerados hospedeiros suscetíveis à infecção com RVA humano, e apontam para a necessidade de controle sanitário da rotavirose humana em colônias de criação de macacos cynomolgus. Esses resultados preliminares sugerem um papel promissor da imunoterapia passiva utilizando IgY anti-RVA em infecção experimental com o rotavírus do grupo A humano. No entanto, um enfoque direto na patogênese da infecção no trato entérico fornecerá informações adicionais para confirmar a eficácia do tratamento com a IgY