Análise da variabilidade genética, filogenia e expressão gênica de HPV de alto risco no Distrito Federal

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: Raiol, Tainá
• Orientador(a): Sichero, Laura, Martins, Cláudia Renata Fernandes
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/43999

Mais de 100 tipos de HPV foram descritos, dos quais 13 são classificados como de alto risco devido à sua associação com o desenvolvimento do câncer cervical. O presente estudo investigou a variabilidade e filogenia dos HPV de alto risco -31, -33, - 35, -52 e -58, isolados a partir de amostras do Distrito Federal. Para tanto, a LCR e os genes E6 e L1 foram sequenciados. Diversos variantes foram detectados, incluindo 13 novos variantes de todos os tipos analisados. A análise filogenética dos isolados de HPV-31, -33, -35 e -58 não revelaram agrupamentos étnicos ou geográficos como observados previamente para os HPV-16 e -18. A análise do HPV-35 mostrou uma topologia dicotômica característica de subtipos do HPV. Interessantemente, quatro agrupamentos foram identificados na análise de variantes de HPV-52, dos quais dois puderam ser classificados como ramos Asiático e Europeu. Além disso, nós comparamos a atividade do promotor de E6/E7 de variantes moleculares do HPV-58 detectados no Distrito Federal, uma vez que este é o segundo tipo mais frequentemente detectado em lesões cervicais de alto grau nessa região. Para este propósito, as sequências da LCR do protótipo do HPV-58 e de três variantes foram amplificadas e clonadas à montante do gene repórter luciferase e transfectados transientemente em células C33. Para comparação, também foram analisadas as sequências da LCR dos HPV-18 e -16. O protótipo do HPV-58 e os variantes Bsb-329 e Bsb-327 mostraram atividade transcricional similar ao HPV-16, mas cerca de seis vezes menor que o HPV- 18. Interessantemente, o variante de HPV-58 Bsb-295 apresentou uma alta atividade transcricional, mesmo comparável ao HPV-18. Esse variante de HPV-58 é o único isolado em que foi detectada a substituição nucleotídica na posição 7788. Foram construídos mutantes por meio de mutagênese sítio-dirigida com o intuito de analisar o impacto dessa alteração nucleotídica na atividade do promotor viral. A introdução da mutação 7788 no isolado protótipo do HPV-58 levou a uma atividade transcricional similar ao observado para o variante Bsb-295 e o protótipo do HPV-18. Em conjunto, os dados indicam que essa única variação é capaz de aumentar a atividade do promotor viral e poderia levar a uma maior expressão dos oncogenes virais E6 e E7 in vivo. Entretanto, estudos adicionais são necessários para identificar os fatores transcricionais celulares envolvidos nessa regulação. O estudo dos variantes de HPV é crucial para entender a sua distribuição geográfica e as diferenças biológicas desses vírus, contribuindo ainda para estudos sobre sua infectividade e patogenicidade.