Avaliação dos efeitos anti-inflamatórios de anticorpos recombinantes, produzidos por meio de um sistema de entrega de dna tendo a bactéria Lactococcus lactis como veículo, no tratamento da colite experimental
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Assim, entender os mecanismos moleculares da patologia e desenvolver novos medicamentos é fundamental para o tratamento destas doenças. Nesse contexto, a citocina TNFa desempenha papel crucial na patogênese de IBD e é atualmente considerada o melhor alvo terapêutico. Entretanto, a via de administração intravenosa de imunoterapias convencionais causa imunogenicidade e efeitos colaterais sistêmicos. Para contornar estas limitações, a entrega local destes medicamentos poderia beneficiar os pacientes, restringindo a terapia no sítio inflamatório. Portanto, o desenvolvimento de linhagens de Lactococcus lactis capazes de entregar um vetor de expressão eucariótica que codifique um fragmento variável de cadeia única (scFv) de anticorpo representa uma nova estratégia para a elaboração de uma terapia alternativa mais efetiva para expressão diretamente no intestino, contra UC. Logo, dois vetores derivados de pValac que codificam dois scFv foram construídos para produção de anti-TNFa e de anti-IL1b e foram testados no modelo de colite induzida por DSS, em camundongos. Após mostrar que os dois vetores eram capazes de induzir a síntese dos anticorpos por cultura de células animais HEK-293, os plasmídeos foram introduzidos em L. lactis MG1363 FnBPA+ para serem testados no modelo in vivo com camundongos C57BL/6. Após 4 dias de tratamento, a administração oral de L. lactis MG1363 FnBPA+ (pValac::anti-TNFa), mas não de L. lactis MG1363 FnBPA+ (pValac::anti-IL1b), se mostrou capaz de melhorar os parâmetros macroscópicos e histológicos da colite. Além disso, os animais tratados apresentaram níveis dos transcritos de mRNA de IL-6, IL17A, IL1b, IL10 e Foxp3 semelhantes aos animais saudáveis. Portanto, marcadores moleculares e morfológicos sugerem melhora da colite induzida experimentalmente. Assim, este estudo fornece evidências para o uso deste sistema alternativo de entrega de biofarmacêuticos in loco para o tratamento de IBD, pavimentando o caminho para uma nova rota biotecnológica de baixo custo e direcionada ao sítio de inflamação para o tratamento de doenças inflamatórias.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).Inflammatory bowel disease (IBD), which includes Crohn’s disease (CD) and ulcerative colitis (UC), is characterized by chronic inflammation of the gastrointestinal tract (GIT) and a cryptogenic origin. Thus, understanding the molecular mechanisms of pathology and developing new drugs is pivotal to the treatment of these diseases. In this context, tumor necrosis factor-a (TNFa) plays a crucial role in the pathogenesis of IBD and it is currently the most considered target for immunotherapy. However, the intravenous administration route of conventional immunotherapy causes immunogenic and systemic side effects. To circumvent these limitations, the local delivery of this pharmaceutical would benefit patients, restricting therapy towards the inflamed tissue. Therefore, the development of Lactococcus lactis strains capable of delivering a eukaryotic expression vector encoding a single-chain fragment variable (scFv) represents a new strategy for the elaboration of a more effective alternative therapy for expression in the GIT lining, against UC. Thus, two scFv coding pValac derived vectors were constructed for producing anti-TNFa and anti-IL1b production, and they were evaluated in a DSSinduced colitis model in mice. After showing that both scFv expression vectors are able to induce antibody protein synthesis the cultured animal cells HEK-293, the plasmids were introduced in L. lactis MG1363 FnBPA+ to be tested in vivo in C57BL/6 mice. After four days of treatment, oral administration of L. lactis MG1363 FnBPA+ (pValac::anti-TNFa), but not L. lactis MG1363 FnBPA+ (pValac::anti-IL1b), was able to improvement the histological and macroscopic score of colitis. Moreover, treated animals display IL-6, IL17A, IL1b, IL10 e Foxp3 mRNA levels similar to health control mice. Therefore, morphological and molecular markers suggest amelioration of the experimentally induced colitis. Hence, this study provides evidences for the use of this alternative system for delivering therapeutic biopharmaceuticals in loco for treating inflammatory bowel disease, paving the way for a novel low-cost and site-specific biotechnological route for the treatment of inflammatory disorders.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Departamento de Biologia Celular (IB CEL)Programa de Pós-Graduação em Biologia MolecularA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições:Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessAvaliação dos efeitos anti-inflamatórios de anticorpos recombinantes, produzidos por meio de um sistema de entrega de dna tendo a bactéria Lactococcus lactis como veículo, no tratamento da colite experimentalinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisDoenças inflamatórias crônicasIntestinos - doençasBactérias lácticasCitocinasporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2019_MariaJoséChiabai.pdf2019_MariaJoséChiabai.pdfapplication/pdf20074235http://repositorio.unb.br/bitstream/10482/35654/1/2019_MariaJos%c3%a9Chiabai.pdfcfbc2cd9b9baba868bb0b901a03ed25bMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain676http://repositorio.unb.br/bitstream/10482/35654/2/license.txt59c0495af143a2dbef8cb1eca992b8cfMD52open access10482/356542025-11-05 17:31:06.449open accessoai:repositorio.unb.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2025-11-05T20:31:06Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB) |
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