Análise da expressão heteróloga de uma serino protease (RnTrypsin) e de um inibidor de serino protease (RnKazalPI) salivares de Rhodnius neglectus, vetor da Doença de Chagas
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Assim, a saliva desse inseto hematófago se torna um relevante alvo de pesquisas devido à presença de moléculas com elevado potencial farmacológico, como por exemplo serino proteases e inibidores de serino protease. Este estudo teve por objetivo a expressão heteróloga da serino protease do tipo tripsina (RnTrypsin) e do inibidor de serino protease tipo Kazal (RnKazalPI) salivares de R. neglectus. As sequências nucleotídicas das proteínas foram obtidas a partir do transcriptoma de R. neglectus, clonadas no vetor pET100/D-TOPO e expressas em bactérias Escherichia coli da linhagem BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS e Rosetta(DE3)pLysS. A serino protease do tipo tripsina (RnTrypsin) recombinante foi observada somente na fração insolúvel após a lise das bactérias, sendo então purificada por cromatografia de afinidade e usada para a produção de anticorpos policlonais em camundongos. Após a otimização do protocolo de expressão, o inibidor de serino protease tipo Kazal (RnKazalPI) foi expresso na fração solúvel do lisado bacteriano. Como perspectiva, é pretendido utilizar o sistema de expressão de proteínas recombinantes em células de inseto/baculovírus para expressar a serino protease do tipo tripsina (RnTrypsin) recombinante na fração solúvel, e também determinar a caracterização do inibidor de serino protease tipo Kazal (RnKazalPI) recombinante solúvel, buscando contribuir na compreensão das interações entre vetor e hospedeiro e potenciais atividades farmacológicas.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).The triatomine Rhodnius neglectus (Hemiptera: Reduviidae) is a potential vector of the protozoan Trypanosoma cruzi, etiologic agent of Chagas' disease. R. neglectus presents in its saliva important molecules that neutralize the haemostatic mechanisms of the host, aiding in the blood supply and, indirectly, in the transmission of the protozoan. Thus, the saliva of this hematophagous insect becomes a relevant research target due to the presence of molecules with high pharmacological potential, for example serine proteases and serine protease inhibitors. This study aimed at the heterologous expression of the trypsin-like serine protease (RnTrypsin) and the Kazal type serine protease inhibitor (RnKazalPI) of R. neglectus. The nucleotide sequences of the proteins were obtained from the transcriptome of R. neglectus, cloned in the vector pET100/D-TOPO and expressed in Escherichia coli bacteria of line BL21(DE3), BL(DE3)pLysS and Rosetta(DE3)pLysS. The recombinant trypsin-like serine protease (RnTrypsin) was observed only in the insoluble fraction after bacterial lysis, and was then purified by affinity chromatography and used for the production of polyclonal antibodies in mice. After optimization of the expression protocol, the Kazal type serine protease inhibitor (RnKazalPI) was expressed in the soluble fraction of the bacterial lysate. As a perspective, it is intended to use the recombinant protein expression system in insect/baculovirus cells to express the recombinant trypsin-like serine protease (RnTrypsin) in the soluble fraction, and also to determine the characterization of the recombinant Kazal type serine protease inhibitor (RnKazalPI), seeking to contribute to the understanding of the interactions between vector and host and potential pharmacological activities.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Ciências MédicasA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessAnálise da expressão heteróloga de uma serino protease (RnTrypsin) e de um inibidor de serino protease (RnKazalPI) salivares de Rhodnius neglectus, vetor da Doença de Chagasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisTriatomíneosProteínas salivaresEscherichia coliDoença de Chagasporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain671http://repositorio.unb.br/bitstream/10482/34286/2/license.txtbacfee268cc5d4f6aaa2e6e0066d38f5MD52open accessORIGINAL2018_CarolineBarretoVieira.pdf2018_CarolineBarretoVieira.pdfapplication/pdf26365897http://repositorio.unb.br/bitstream/10482/34286/3/2018_CarolineBarretoVieira.pdfdc507651968cbe66cbb29372c5dd7b54MD53open access10482/342862024-09-19 12:30:36.265open accessoai:repositorio.unb.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-09-19T15:30:36Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB) |
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