Padronização de um modelo de dor central associado a neurodegeneração: avaliação do potencial efeito antinociceptivo da VD-hemopressina

• Main Author: Oliveira, Victhor Teixeira de
• Publication Date: 2025
• Format: Doctoral thesis
• Language: por
• Source: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP
• Download full: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/42/42138/tde-14102025-080426/
• topic: Alzheimer\'s Disease; Central Neuropathic Pain; Doença de Alzheimer; Dor neuropática central; Hemopressin; Hemopressina

A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa caracterizada pela perda progressiva de memória e deterioração das funções cognitivas. A dor é um problema comum entre pessoas com demência, manifestando-se na DA principalmente como dor neuropática central (DC), decorrente de lesões no sistema nervoso central. Essa condição leva ao desenvolvimento de quadros de hipersensibilidade, como a alodinia, sendo considerada uma das formas mais desafiadoras de dor para tratamento. A ativação glial e a neuroinflamação na medula espinal não são apenas características da DC, mas também eventos recorrentes na DA, especialmente quando há comprometimento das funções do hipocampais. O hipocampo, além de seu papel fundamental na memória e no aprendizado, está funcionalmente conectado a diversas regiões envolvidas no controle e processamento da dor, incluindo o locus coeruleus (LC). O LC, por sua vez, é a principal fonte de noradrenalina para o sistema nervoso central e desempenha um papel crucial na modulação descendente da dor. Desordens inflamatórias no hipocampo, frequentemente observadas na DA, podem alterar o funcionamento da via noradrenérgica originada no LC. Essa disfunção leva a um desequilíbrio nos mecanismos inibitórios da dor e contribui para a propagação da neuroinflamação na medula espinal, onde a ativação da glia exacerba o quadro doloroso. Assim, o eixo hipocampoLCmedula espinal emerge como uma via crítica na interação entre processos neurodegenerativos e o desenvolvimento da DC na DA. Peptídeos da família da hemopressina (Hp) apresentam grande potencial terapêutico tanto para o tratamento da dor neuropática quanto da DA, por sua capacidade de modular o sistema endocanabinoide. A hemopressina (Hp) atua como agonista inverso e a VDhemopressina (VD-Hp) como agonista do receptor canabinoide do tipo 1 (CB1R), promovendo efeitos anti-inflamatórios e modulando a transmissão nervosa. No entanto, ainda há lacunas quanto aos efeitos desses peptídeos na DC associada à DA, o que justifica a realização de estudos investigativos. Para isso, ratos Wistar machos (90 dias, 250350 g) foram submetidos a injeção bilateral intracerebroventricular de estreptozotocina (icv-STZ), visando mimetizar os processos neurodegenerativos característicos da DA esporádica. Para padronização do modelo de DC, foram avaliadas alodinia mecânica (monofilamentos de Von Frey), térmica ao frio (teste do spray de acetona) e ao quente (teste da placa quente) nos 7º e 14º dias após a icv-STZ. A avaliação cognitiva foi realizada pelo teste de reconhecimento de objetos nos dias 6 e 7, juntamente com o teste de campo aberto (3 minutos iniciais da fase de habituação), para verificar a atividade geral. Também foi avaliado o envolvimento do sistema noradrenérgico por meio da administração de duloxetina (20 mg/kg, i.p.) no 7º dia após a cirurgia. O protocolo consistiu em uma avaliação aguda (1, 3 e 6h pós-administração) e uma crônica (tratamento por 7 dias consecutivos com avaliações nos dias 7, 8, 10, 12 e 14). Os testes de Von Frey, spray de acetona e placa quente foram empregados em ambas as avaliações. Amostras de hipocampo, medula espinal e LC foram coletadas para análise ao final dos experimentos. Para avaliar o efeito antinociceptivo agudo da Hp e VD-Hp, os peptídeos foram administrados via intraperitoneal (0,25 mg/kg) no 7º dia após a cirurgia, e a alodinia foi avaliada 1, 3 e 6 horas após a aplicação. No protocolo crônico, os peptídeos foram administrados diariamente por 7 dias consecutivos, iniciando no 7º dia pós-cirurgia. Os testes nociceptivos foram realizados nos dias 7, 8, 10, 12 e 14. Ao final do período experimental, foram coletadas amostras do hipocampo, LC e medula espinal para análises por imunofluorescência, imunohistoquímica e immunoblotting, com foco na neuroinflamação e na expressão de CB1R. Os resultados demonstraram que o modelo de DC associado à neurodegeneração induziu comprometimento cognitivo relacionado à memória de curta e longa duração, sem alterações significativas na atividade geral. Os testes nociceptivos confirmaram a presença de alodinia mecânica e térmica (ao frio e ao quente) durante todo o período avaliado. No 14º dia, o grupo icv-STZ apresentou aumento na marcação de IBA-1 na área CA1 do hipocampo e na medula espinal. A expressão de GFAP também foi aumentada na área CA1, mas diminuída na medula espinal. A duloxetina, tanto em tratamento agudo quanto crônico, promoveu reversão da alodinia mecânica e térmica, além de também elevar os níveis de tirosina hidroxilase (TH) no LC. A avaliação aguda com Hp e VD-Hp revelou reversão significativa dos limiares nociceptivos mecânicos e térmicos (frio e quente) nas avaliações realizadas 1, 3 e 6 horas após a administração. De forma semelhante, o tratamento crônico também resultou em reversão sustentada da alodinia durante todo o período de avaliação. Além disso, os peptídeos foram capazes de reverter o déficit cognitivo relacionado à memória, sem prejuízo na atividade geral dos animais. A análise imunofluorescente do hipocampo mostrou que a icv-STZ induziu redução significativa na expressão de CB1R, a qual foi revertida com os tratamentos, sugerindo um efeito central dos peptídeos. Na medula espinal, observou-se uma diminuição da dupla marcação de CB1R em astrócitos, sendo essa expressão restaurada após tratamento com Hp e VD-Hp. Além disso, os peptídeos reduziram a neuroinflamação na medula espinal por meio da ativação de CB1R, com diminuição significativa da colocalização de NF-kB e IL-6 em GFAP. O immunoblotting exibiu uma diminuição de GFAP e CB1R acompanhada do aumento de IL-6. A Hp e VD-Hp aumentaram os níveis de GFAP e CB1R e reduziram a IL-6. Por fim, ambos os peptídeos restauraram os níveis de TH no LC observada por imunohistoquímica. Os resultados deste estudo demonstram de forma clara o potencial terapêutico dos peptídeos da família da Hp no manejo da DC associada à DA. O modelo experimental estabelecido (icv-STZ), reproduziu com sucesso os principais aspectos da patologia, incluindo comprometimento cognitivo e a presença de alodinia mecânica e térmica persistente. Em conjunto, os dados obtidos ressaltam a eficácia da Hp e da VD-Hp na modulação do eixo hipocampoLCmedula espinal, evidenciando seu duplo benefício no alívio da DC e na melhora do desempenho cognitivo em um modelo de DA. Estes achados não apenas contribuem para a compreensão dos mecanismos subjacentes à interação entre neurodegeneração e dor, mas também apontam para novas perspectivas terapêuticas envolvendo a modulação do sistema endocanabinoide no tratamento da dor associada à DA