Efeito do β-mercaptoetanol na criotolerância à vitrificação em embriões bovinos produzidos in vitro

• Main Author: Mattos, Karine de
• Publication Date: 2019
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRGS
• Download full: http://hdl.handle.net/10183/196406
• topic: Melhoramento genetico animal; Stress oxidativo; Criopreservação; Embrião animal; oxidative stress; cryosurvival; cryopreservation; bovine embryo

O controle do processo oxidativo nos sistemas de produção in vitro (PIV) de embriões bovinos através do uso de aditivos pode ser uma abordagem alternativa para melhorar a criotolerância embrionária. O objetivo deste estudo foi verificar o efeito do β-mercaptoetanol (βME) na criotolerância de embriões bovinos PIV. Foram realizados dois experimentos. No Experimento I, embriões de PIV foram vitrificados no Dia 7 de desenvolvimento, e após o aquecimento, foram cultivados in vitro em meio contendo 0, 50 ou 100 μM de βME por 72 h, quando as taxas de eclosão foram avaliadas. A melhor concentração de βME encontrada no Experimento I foi utilizada para o Experimento II. No Experimento II, após a MIV-FIV, os presumíveis zigotos foram cultivados in vitro na presença (tratamento CIV) ou ausência de βME, durante 7 dias. Os blastocistos de excelente e boa qualidade foram vitrificados. Após o aquecimento, os embriões foram alocados aleatoriamente em dois subgrupos e cultivados por 72 h adicionais até o estádio de blastocisto eclodido em meio SOF suplementado (tratamento CPA) ou não com βME. Os grupos experimentais foram compostos da seguinte forma: G1 (meio isento de βME durante CIV e CPA); G2 (βME apenas durante a CPA); G3 (βME apenas durante CIV); G4 (βME durante CIV e CPA). No Experimento I, verificou-se que a concentração de 100 μM de βME foi mais eficiente, produzindo maior taxa de eclosão. No Experimento II contatou-se que o uso de βME durante o CIV não afetou as taxas de clivagem (G1, 80,2% vs. G3, 81,1%), mas afetou negativamente o desenvolvimento ao estádio de blastocisto (G1, 43,8% vs. G3, 28,0%). Após a vitrificação, entretanto, a suplementação de βME durante o CIV, com ou sem adição de βME no CPA, melhorou a taxa de reexpansão (CIV 84,0% e CIV/CPA 87,5% vs. controle 71,0%) O βME no CPA melhorou as taxas de eclosão (G2, 58,1% e G4, 63,8%) em comparação com os grupos sem o aditivo (G1, 36,6% e G3, 42,0%). Além disso, a presença de βME durante o CIV ou CPA, ou mesmo durante ambos os períodos de cultivo, aumentou o número total de células em blastocistos eclodidos de embriões vitrificados. Em conclusão, a adição de βME durante o período de CIV não afetou a clivagem, mas reduziu o desenvolvimento até blastocisto. Apesar disto, a suplementação de βME durante o período de CIV aumentou a criotolerância dos blastocistos, observada pelo aumento na taxa de reexpansão, enquanto a suplementação de βME durante o período CPA também melhorou a sobrevivência dos embriões após a vitrificação, manifestada por maiores taxas de eclosão, número total de células em blastocistos eclodidos.