Sensitivity evaluation of a single-step PCR assay using Ehrlichia canis p28 gene as a target and its application in diagnosis of canine ehrlichiosis

• Main Author: Nakaghi, Andrea Cristina Higa [UNESP]
• Publication Date: 2010
• Other Authors: Machado, Rosangela Zacarias [UNESP], Ferro, Jesus Aparecido [UNESP], Labruna, Marcelo Bahia, Chryssafidis, Andreas Lazaros, André, Marcos Rogério [UNESP], Baldani, Cristiane Divan [UNESP]
• Format: Article
• Language: eng
• Source: Repositório Institucional da UNESP
• Download full: http://dx.doi.org/10.4322/rbpv.01902001; http://hdl.handle.net/11449/3116
• topic: Ehrichia canis; PCR; p28; gene dsb; gene 16S rRNA; Ehrlichia canis; PCR; p28; dsb gene; 16S rRNA gene

O objetivo deste estudo foi aperfeiçoar um ensaio de PCR que amplificasse um fragmento de 843 pares de bases do gene p28 da Ehrlichia canis e compará-lo com outros dois métodos de PCR utilizados para amplificar partes do gene 16S rRNA e dsb do gênero Ehrlichia. Amostras sanguíneas foram colhidas de cães com diagnóstico clínico de erliquiose. A amplificação do gene p28 pela PCR produziu um fragmento de 843pb e esse ensaio permitiu a detecção do DNA de um parasita dentre 1 bilhão de células. Todas as amostras positivas detectadas pela PCR baseada no gene p28 foram também positivas pela nested PCR para detecção do gene 16S rRNA e também pela PCR dsb. Dentre as amostras negativas para a PCR p28, 55,3% foram co-negativas, mas 27,6% foram positivas pela PCR baseada nos genes 16S rRNA e dsb. A PCR p28 parece ser um teste útil para detecção molecular de E. canis, entretanto otimizações na sensibilidade nesta PCR são necessárias, para que esta técnica se torne uma importante alternativa no diagnóstico da erliquiose canina.