Efeito dos hormônios esteroides e seus antagonistas na modulação do sistema renina-angiotensina-aldosterona em células mesangiais humanas imortalizadas

• Main Author: Stoll, Danielle [UNIFESP]
• Publication Date: 2023
• Format: Doctoral thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UNIFESP
• Download full: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/69036
• topic: Sistema renina-angiotensina aldosterona; Hormônios esteroides; Espironolactona,; Mifepristona; Células mesangiais

As células mesangiais (CM) desempenham um importante papel na manutenção da integridade do glomérulo e participam do processo de filtração glomerular. Essas células são capazes de sintetizar diferentes moléculas incluindo hormônios e os componentes do Sistema Renina-Angiotensina-Aldosterona (SRAA). Os hormônios esteroides participam de vários processos metabólicos e são capazes de modular a atividade de diferentes tipos celulares. No presente estudo avaliamos o papel da aldosterona (Aldo) e dexametasona (Dexa), assim como de seus respectivos antagonistas – espironolactona (Spi) e mifepristona (Mife) - na modulação da atividade das enzimas do SRAA e nas possíveis alterações fisiológicas das células mesangiais humanas imortalizadas (CMHI). A cultura de CMHI foi dividida em dois grupos de estudo. O primeiro grupo inclui: controle (apenas meio de cultura), estímulo com angiotensina II (1 μM, Ang II), antagonista da aldosterona (10 nM de espironolactona, Spi), aldosterona (10 nM, Aldo), dexametasona (10 nM, Dexa), aldosterona + dexametasona (10 nM, Aldo+Dexa) e o antagonista da dexametasona (10 nM de mifepristona, Mife). O grupo dois inclui o controle (apenas meio de cultura), e os grupos com a combinação dos antagonistas e drogas na concentração final de 10nM cada. Espironolactona + aldosterona (Spi+Aldo), espironolactona + dexametasona (Spi+Dexa), espironolactona + aldosterona + dexametasona (Spi+Aldo+Dexa), mifepristona + aldosterona (Mife+Aldo), mifepristona + dexametasona (Mife+Dexa), mifepristona + aldosterona + dexametasona (Mife+Aldo+Dexa). Foram realizados ensaios de viabilidade, adesão e migração celular, imunofluorescência para avaliar a expressão do colágeno tipo IV (CIV), ensaios enzimáticos de fluorescência utilizando substratos fluorogênicos para avaliar as atividades da enzima conversora de angiotensina (ECA), ECA2, neprilisina (NEP), renina e catepsina D (cat-D). A quantificação de peptídeos foi realizada através da espectrometria de massas. Nossos resultados mostraram que o pré-tratamento com antagonistas seguido de hormônios esteroides reduz a viabilidade das CMHI após 4 h de estímulo. A Spi per se aumenta a viabilidade e a capacidade adesiva das CMHI, mas não altera a capacidade de migração. Na presença da Aldo após estimulo com Spi, esta não foi capaz de manter a viabilidade das CMHI, mas manteve a capacidade de aderir e migrar de maneira semelhante ao controle. A mifepristona modula a expressão do CIV e na presença dos hormônios esteroides aumenta a capacidade adesiva dessas células. A atividade enzimática não demonstrou alterações com os diferentes estímulos, mas a quantificação dos peptídeos demonstrou que as diferentes interações entre hormônios e receptores altera o perfil peptídico nas CMHI, sugerindo papel importante dos hormônios esteroides e seus antagonistas na formação de diferentes angiotensinas. Estudos de sinalização ainda se fazem necessários a fim de elucidar a atividade desses hormônios/receptores em CMHI.