Mecanismos de ação antitumoral de peptídeos baseados em sequências hipervariáveis de imunoglobulinas contra o melanoma murino B16F10-NEX2

• Autor(a) principal: Girola, Natalia [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• dARK ID: ark:/48912/001300002xnqj
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=9827947; https://hdl.handle.net/11600/64174
• topic: Melanoma; Peptídeo antitumoral; CDRs de imunoglobulinas; Migração celular; Morte celular; Microtúbulos

Apesar do progresso na compreensão da carcinogênese, o câncer ainda é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo. O melanoma é um tipo letal de câncer de pele amplamente resistente às terapias convencionais. O desenvolvimento de novas terapias, baseadas em peptídeos biologicamente ativos, especialmente peptídeos derivados de CDR, surgiu como uma nova alternativa para combater o câncer. Neste trabalho, avaliamos a atividade antitumoral in vivo e in vitro de dois peptídeos sintéticos derivados de CDRs de anticorpos monoclonais contra linhagens de células tumorais humanas e murinas, com especial ênfase ao modelo de melanoma B16F10-Nex2. O primeiro a ser estudado, o peptídeo Rb9, derivado do CDR3 da cadeia pesada do RebmAb 200, induziu hiperaderência ao substrato, inibição da migração e invasão de células de melanoma e outras linhagens tumorais. Rb9 também inibiu a metástase de melanoma no modelo singenêico murino. Demonstramos que Rb9 se liga e interefere com a atividade da chaperona Hsp90 causando atenuação da sinalização de FAK-Src e regulação negativa de Rac1. O peptídeo também se ligou a um receptor acoplado à proteína G de adesão, desencadeando o aumento da síntese de AMPc e, consequentemente, a ativação de PKA e VASP. Além disso, através da análise de dinâmica molecular, o Rb9 foi altamente estável. O segundo peptideo estudado, Rb44, derivado do CDR1 da cadeia leve do RebmAb 300 interferiu com os microtúbulos induzindo despolimerização, com subsequente degradação dos filamentos de actina, levando a despolarização do potencial de membrana mitocondrial, aumento de ROS, parada do ciclo celular em G2/M, clivagem de caspase-9, caspase-3 e PARP, regulação positiva de Bax e regulação negativa de Bcl-2, resultando em apoptose intrínseca de células de melanoma. A inibição in vitro da angiogênese também foi um efeito do Rb44. A injeção peritumoral de Rb44L1 retardou o crescimento de células de melanoma injetadas subcutaneamente no modelo singeneico murino. CDRs-L1 de imunoglobulinas e suas interações com dímeros de tubulina foram explorados para interpretar os efeitos sobre a estabilidade dos microtúbulos. O movimento de abertura dos monômeros de tubulina permitiram o acoplamento do Rb44L1 eficientemente, o que levou ao comprometimento da formação dos microtúbulos. Em conclusão, o presente trabalho mostra dois novos candidatos com propriedades antitumorais específicas e potencial para o seu desenvolvimento levando a drogas antitumorais. Além disso, o Rb9 e Rb44 são exemplos relevantes de peptídeos derivados de CDR de imunoglobulinas que possuem atividades biológicas importantes, independentemente da especificidade do anticorpo original.