Validação de biossensor fluorescente da razão intracelular ATP : ADP em células vivas

• Main Author: Lorenzatto, Paola Farias
• Publication Date: 2024
• Format: Bachelor thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UFRGS
• Download full: http://hdl.handle.net/10183/277559
• topic: Trifosfato de adenosina; Linhagem celular tumoral; Glioblastoma; Reprogramação metabólica; Microscopia confocal; Fluorescência; ATP; Perceval; Metabolic reprogramming; Cancer

O status energético do metabolismo celular é responsável por regular a atividade de diversas enzimas envolvidas em diferentes processos celulares, como a divisão celular. A hidrólise da molécula de adenosina 5’-trifosfato (ATP) é a principal fonte de energia pelas células, sendo que sua concentração fisiológica impacta diretamente na atividade metabólica e no comportamento celular. Em condições fisiológicas, o processo de obtenção de ATP se inicia pela via glicolítica, que é responsável por oxidar a molécula de glicose e, posteriormente, enviar seus metabólitos para a cadeia transportadora de elétrons - a principal via de obtenção de moléculas de ATP. No entanto, em células proliferativas e em células tumorais, a glicólise se torna a principal fonte de obtenção de ATP - uma reprogramação metabólica, denominada efeito Warburg, já bem descrita em tumores. Neste contexto, este trabalho foi proposto como uma forma de validar o uso de um biossensor fluorescente repórter da razão intracelular ATP:ADP, o GW1CMV-Perceval, e verificar sua funcionalidade em células de linhagens celulares de glioblastoma humano por meio da expressão transiente do vetor e de diferentes métodos de análises de fluorescência. Os dados preliminares apresentados demonstram a funcionalidade do sensor em diferentes linhagens celulares (normal e tumoral) e sugerem a capacidade do plasmídeo em medir alterações na razão intracelular ATP:ADP induzidas por tratamentos com inibidores da via glicolítica e da fosforilação oxidativa a nível populacional e de células únicas - sendo uma potencial ferramenta para contribuir no estudo do metabolismo de células tumorais e do seu impacto na resistência aos tratamentos usuais.