Desenvolvimento e aplicação de um teste PCR multiplex para a detecção rápida dos principais patógenos bacterianos na sepse neonatal precoce

• Main Author: Silva Junior, Walter Peres
• Publication Date: 2015
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UFMS
• Download full: https://repositorio.ufms.br/handle/123456789/2917
• topic: Sepse; Reação em Cadeia da Polimerase Multiplex; Técnicas de Diagnóstico Molecular; Sepsis; Multiplex Polymerase Chain Reaction; Molecular Diagnostic Techniques

Introdução: A sepse ainda é uma das principais causas de morbidade e mortalidade no período neonatal. Quando a etiologia da sepse é bacteriana o diagnóstico confirmatório depende de exames microbiológicos baseados em hemoculturas que, apesar de serem ainda consideradas o padrão-ouro, demoram de 48 a 72 horas para oferecer resultados, além de possuirem baixa sensibilidade. Objetivo: Padronizar um novo método molecular, através da técnica de reação em cadeia da polimerase em tempo real multiplex (PCRtr), capaz de um inferir diagnóstico rápido e específico dos principais agentes na sepse bacteriana neonatal precoce (SNP). Metodologia: O estudo foi desenvolvido no período de setembro de 2013 a fevereiro de 2014. Amostras de sangue de recém-nascidos internados nas UTI neonatais da SCCG, HRMS e HU foram coletadas e analisadas através do método PCRtr heptaplex para detecção de Streptococcus agalactiae, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter sp., Serratia sp. e Staphylococcus aureus. Também foi incluído o primer universal nas análises. Resultados: Foram estudados 150 recém-nascidos com sepse clínica e 10 recémnascidos controles saudáveis. Do grupo com sepse clínica 100% apresentaram positividade para presença de DNA genômico bacteriano através do primer universal. O grupo controle apresentou negatividade no PCRtr e na hemocultura. As hemoculturas do grupo com sepse foi negativa em 97% dos casos. A análise das curvas da PCRtr heptaplex demonstrou que 76% das amostras foram positivas para Escherichia coli, 34,7% para Staphylococcus aureus, 13,3% para Streptococcus agalactiae, 7,3% para Pseudomonas aeruginosa e 0,7% para Enterobacter sp. e Serratia sp., cada um . A PCRtr heptaplex dos pacientes com sepse clínica foram microbiologicamente confirmadas no sangue em 8,1% das amostras. A taxa de concordância entre o PCRtr heptaplex e a hemocultura positiva pela mesma bactéria foi de 75%. Discussão: Os resultados confirmam uma maior taxa de positividade do PCRtr em comparação com os métodos baseados em cultura. A taxa de concordância das hemoculturas positivas com a detecção da mesma bactéria no PCRtr heptaplex está de acordo com o encontrado na literatura. Foi encontrado um predomínio de bactérias gram-negativas entre o total, corroborando o achado em outras populações semelhantes em países em desenvolvimento. Conclusão: O desenvolvimento deste novo teste baseado em PCRtr multiplex para a detecção rápida e sensível de importantes patógenos causadores de SNP pode potencialmente se sobressair em comparação com os métodos microbiológicos baseados em cultura, com o objetivo de facilitar a progressão para um terapia antimicrobiana que seja mais específica, evitando o uso abusivo de antibióticos nas UTI neonatais.