Análise proteômica do fungo Paracoccidioides brasiliensis sob privação de cobre

• Main Author: Petito, Guilherme
• Publication Date: 2020
• Format: Doctoral thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UFG
• dARK ID: ark:/38995/001300000jnpd
• Download full: http://repositorio.bc.ufg.br/tede/handle/tede/10648
• topic: Paracoccidioides spp.; Proteomica; iTRAQ; Paracoccidiodomicose; Proteomic; Paracoccidioidomycosis; CIENCIAS BIOLOGICAS

O cobre é um importante micronutriente que atua como cofator em enzimas que participam em processos de obtenção de energia, redução de espécies reativas de oxigênio e captação de metal, como o ferro. Estudos com diferentes fungos patogênicos demonstram a importância de um sistema eficiente de homeostase de cobre, bem como o impacto da privação desse metal no metabolismo desses organismos. Entretanto, pouco se sabe acerca do impacto da privação de cobre em fungos patogênicos do gênero Paracoccidioides. Dessa forma, objetivou-se com este estudo analisar o comportamento proteômico do fungo Paracoccidioides brasiliensis durante a privação de cobre, identificando as alterações metabólicas frente a essa condição. A análise proteômicas foi realizada utilizando espectrometria de massas e marcação das amostras com iTRAQ (Isobariq tag for relative and absolute quantitation). Além disso, foram aplicadas neste estudo metodologias como qRTPCR, microscopia de fluorescência, atividades enzimáticas e Western bloting, com intuito de validar os dados proteômicos analisados. Foram identificadas 183 proteínas diferencialmente expressas. Proteínas relacionadas à gliconeogênese, beta-oxidação e remodelamento de parede estavam com expressão aumentada na condição de privação de cobre. Identificamos diminuição na expressão de uma importante enzima de detoxificação, a superóxido dismutase Cu/Zn dependente (Sod1p). Por outro lado, as enzimas tioredoxina (Trxp), glutationa-S-transferase (GST) e superóxido dismutase Mn/Fe dependente (Sod2p) estavam up-reguladas. Também enzimas da via das pentoses-fosfato relacionadas à produção de NADPH, importante agente redudor de enzimas de detoxificação foram aumentadas. Uma oxidase alternativa (Aoxp) estava com expressão aumentada, enquanto testes de atividades enzimáticas demonstraram que a atividade da enzima citocromo c oxidase (Coxp) estava diminuída. A expressão chaperona de cobre, Atx1, relacionada com captação de ferro e descrita como importante em reposta ao estresse oxidativo, estava aumentada. Propomos aqui uma visão geral que apresenta as principais mudanças metabólicas em P. brasiliensis sob privação de cobre, que incluem mudanças no processo de obtenção de energia, no fluxo do metabolismo de carbono, no remodelamento de parede, nos processos de detoxificação e de respiração.