Expressão transiente do gene codificador do precursor da proteína estrutural E2 (pE2) do vírus Chikungunya em plantas de Nicotiana benthamiana pelo sistema Magnifectiontm™

• Autor(a) principal: Rocha, Gabriel Iudy Yamaguchi
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UCB
• Texto Completo: https://bdtd.ucb.br:8443/jspui/handle/tede/3228
• topic: pE2; Chikungunya; Expressão heteróloga; Nicotiana benthamiana; Plant molecular farming; Heterologous expression; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS

As arboviroses representam uma grande ameaça à saúde pública, principalmente no Brasil. Os brasileiros sofrem com infecções arbovirais desde 1845, ano no qual ocorreu o primeiro grande surto do vírus da dengue (DENV). Em 2014, foi relatado o primeiro caso de Chikungunya (CHIKV) no Brasil, o qual acometeu mais de mil pessoas em seu primeiro ano. Somente no ano de 2022, foram diagnosticados mais de 200.000 casos da febre Chikungunya, tornando-se um problema em ascensão, principalmente nas regiões Nordeste e Centro-Oeste do país. Desse modo, surge a necessidade do desenvolvimento de abordagens mais diretas para o controle do vírus, como, por exemplo, a elaboração de vacinas. Um dos meios para a produção de vacinas é a utilização de proteínas estruturais do CHIKV para serem utilizadas como antígenos vacinais. Diante deste cenário, uma estratégia para a produção de proteínas estruturais do CHIKV em concentrações elevadas é a expressão de transgenes que codificam essas proteínas em sistemas vegetais, os quais vêm sendo utilizados para a produção de proteínas recombinantes biologicamente ativas e antígenos vacinais importantes. Portanto, o presente trabalho teve como objetivo expressar o precursor da proteína estrutural E2 (pE2) do vírus Chikungunya em folhas de N. benthamiana, de forma heteróloga, utilizando o método MagnifectionTM. Para tal, foram clonados no vetor de expressão pICH31070 os fragmentos genéticos portadores das sequências codificadoras da pE2 (com e sem a sequência da cauda de histidina), resultando nos vetores recombinantes pICH·pE2 e pICH·pE26His. Esses vetores foram checados por clivagem com endonucleases de restrição e sequenciamento de Sanger. Após a confirmação de que as clonagens moleculares dos insertos no vetor de expressão foram realizadas corretamente, 142 plantas de N. benthamiana foram transformadas por vácuo e suas proteínas solúveis totais foram extraídas e analisadas por SDS-PAGE. Os dados obtidos sugerem que foi possível transformar geneticamente as folhas de N. benthamiana, bem como expressar o transgene codificador do pE2, visto que, após sua purificação por cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados, foi possível detectar a biossíntese da proteína por ensaio imunológico utilizando anticorpo monoclonal.