Diversidade filogenética e resistência a antibióticos em bactérias coliformes no molusco Phorcus lineatus da costa noroeste de Portugal

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pinto, Ana Rita Barreira
Data de Publicação: 2024
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/10348/12885
Resumo: Phorcus lineatus é uma espécie de molusco presente na Costa Atlântica Norte Portuguesa, sendo mais comum em áreas rochosas com rachaduras e fendas, e às vezes sob pedregulhos. Devido às suas características ecobiológicas, o P. lineatus é considerado um bioindicador útil para a biomonitorização ambiental, para avaliar a qualidade do habitat costeiro e o impacto das atividades antropogénicas no ambiente marinho. A resistência a antimicrobianos (RAM) tem consequências graves na saúde global, pelo que é cada vez mais importante que todos os setores - numa abordagem One Healthtrabalhem juntos para o uso adequado de antibióticos promovendo estratégias de prevenção, de forma a mitigar este problema. O principal objetivo deste trabalho é avaliar a presença de bactérias coliformes utilizando meios seletivos e diferenciais e determinar o perfil de resistência a antibióticos de isolados obtidos do P. lineatus recolhidos em quatro locais da Costa Atlântica: 1. Amorosa; 2. Cabo do Mundo; 3. Homem do Leme; e 4. S. Félix da Marinha, bem como, determinar os grupos filogenéticos por PCR multiplex, e observar as características filogenéticas de Escherichia coli, através dos filogrupos (Clermont et al., 2013). Para a realização dos testes de suscetibilidade aos antibióticos (TSA) foi usado o método de difusão em disco em meio Mueller-Hinton Agar, de acordo com as normas EUCAST 2023. Dos 48 moluscos recolhidos nos 4 locais foram obtidos 103 isolados - Enterobactereaceae (86) dos quais dezoito isolados foram identificados como Escherichia coli por métodos bioquímicos (IMViC) e confirmados por identificação genética. Com os resultados obtidos para o teste de suscetibilidade aos 23 antibióticos avaliados, de diferentes grupos, observou-se uma maior incidência de resistência no local 2 (Homem do Leme). Contudo todos os isolados demonstraram resistência à classe dos Aminoglicosídeos (Tobramicina 100%). Na determinação dos patótipos não se observou nenhum isolado com patogenicidade, contudo obtivemos uma grande diversidade de grupos filogenéticos; A, 28% (5/18); A ou C, 11% (2/18); B1, 22% (4/18); B2, 22% (5/18) e E ou D, 11% (2/18). Estes resultados demonstraram que este estudo é fundamental para a monitorização da RAM nos ecossistemas marinhos, especialmente devido às suas estreitas conexões com a cadeia alimentar, assim como a importância de adotar uma abordagem integrada e multidisciplinar para a biomonitorização ambiental, usando P. lineatus, permitindo uma abordagem e uma visão mais completa das condições ambientais, contribuindo para a gestão sustentável dos ecossistemas marinhos assim como da cadeia alimentar, uma vez que a distribuição geográfica, a densidade populacional, o aumento das indústrias podem afetar o ambiente, o homem e a saúde pública, daí ser cada vez mais importante e essencial uma abordagem "One Health-EcoHealth", para considerar as interações entre elementos geográficos, ecológicos e atividades humanas, reconhecendo a complexidade dos sistemas naturais e a influência das ações humanas nesses sistemas.
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O principal objetivo deste trabalho é avaliar a presença de bactérias coliformes utilizando meios seletivos e diferenciais e determinar o perfil de resistência a antibióticos de isolados obtidos do P. lineatus recolhidos em quatro locais da Costa Atlântica: 1. Amorosa; 2. Cabo do Mundo; 3. Homem do Leme; e 4. S. Félix da Marinha, bem como, determinar os grupos filogenéticos por PCR multiplex, e observar as características filogenéticas de Escherichia coli, através dos filogrupos (Clermont et al., 2013). Para a realização dos testes de suscetibilidade aos antibióticos (TSA) foi usado o método de difusão em disco em meio Mueller-Hinton Agar, de acordo com as normas EUCAST 2023. Dos 48 moluscos recolhidos nos 4 locais foram obtidos 103 isolados - Enterobactereaceae (86) dos quais dezoito isolados foram identificados como Escherichia coli por métodos bioquímicos (IMViC) e confirmados por identificação genética. Com os resultados obtidos para o teste de suscetibilidade aos 23 antibióticos avaliados, de diferentes grupos, observou-se uma maior incidência de resistência no local 2 (Homem do Leme). Contudo todos os isolados demonstraram resistência à classe dos Aminoglicosídeos (Tobramicina 100%). Na determinação dos patótipos não se observou nenhum isolado com patogenicidade, contudo obtivemos uma grande diversidade de grupos filogenéticos; A, 28% (5/18); A ou C, 11% (2/18); B1, 22% (4/18); B2, 22% (5/18) e E ou D, 11% (2/18). Estes resultados demonstraram que este estudo é fundamental para a monitorização da RAM nos ecossistemas marinhos, especialmente devido às suas estreitas conexões com a cadeia alimentar, assim como a importância de adotar uma abordagem integrada e multidisciplinar para a biomonitorização ambiental, usando P. lineatus, permitindo uma abordagem e uma visão mais completa das condições ambientais, contribuindo para a gestão sustentável dos ecossistemas marinhos assim como da cadeia alimentar, uma vez que a distribuição geográfica, a densidade populacional, o aumento das indústrias podem afetar o ambiente, o homem e a saúde pública, daí ser cada vez mais importante e essencial uma abordagem "One Health-EcoHealth", para considerar as interações entre elementos geográficos, ecológicos e atividades humanas, reconhecendo a complexidade dos sistemas naturais e a influência das ações humanas nesses sistemas.Phorcus lineatus is a species of mollusc found on Portugal's North Atlantic Coast and is most common in rocky areas with cracks and crevices, and sometimes under boulders. Due to its ecobiological characteristics, P. lineatus is considered a useful bioindicator for environmental biomonitoring, to assess the quality of the coastal habitat and the impact of anthropogenic activities on the marine environment. Antimicrobial resistance (AMR) has serious consequences for global health, which is why it is increasingly important for all sectors to work together for the proper use of antibiotics by promoting prevention strategies. The main objective of this work is to evaluate the presence of coliform bacteria using selective and differential media and the antibiotic resistance profile of isolates obtained from P. lineatus collected from four sites 1. Amorosa; 2. Cabo do Mundo; 3. Homem do Leme; 4. S. Félix da Marinha. As well as determining the phylogenetic groups by multiplex PCR, and observing the phylogenetic characteristics of Escherichia coli, through the current eight phylogroups (Clermont et al., 2013). For antibiotic susceptibility testing (ASCT), the disk diffusion method was used on Mueller-Hinton Agar medium, according to EUCAST 2023 standards. From the 48 molluscs collected at the 4 locations, 103 isolates were obtained - Enterobactereaceae (86) of which eighteen isolates were identified as Escherichia coli by biochemical methods (IMViC). The results obtained from the susceptibility test for the 23 antibiotics showed a higher incidence of resistance at site 2 (Homem do Leme). However, all the isolates showed resistance to the Aminoglycoside class (Tobramycin 100%). When determining pathotypes, we didn't find any isolates with pathogenicity, but we did find a great diversity of phylogenetic groups: A, 28% (5/18); A or C, 11% (2/18); B1, 22% (4/18); B2, 22% (5/18) and E or D, 11% (2/18). These results demonstrated that this study is fundamental for monitoring AMR in marine ecosystems, especially due to its close connections with the food chain, as well as the importance of adopting an integrated and multidisciplinary approach to environmental biomonitoring, using P. lineatus as a bioindicator species. Allowing a more complete and reliable approach and view of environmental conditions, contributing to the sustainable management of marine ecosystems as well as the food chain, since geographical distribution, population density, the increase in industries can affect the environment, man and health, hence a "One Health-EcoHealth" approach is increasingly important and essential, to consider the interactions between geographical, ecological elements and human activities, recognizing the complexity of natural systems and the influence of human actions on these systems.2024-09-19T11:46:33Z2027-05-22T00:00:00Z2024-05-22T00:00:00Z2024-05-222024-08-06info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfapplication/pdfapplication/pdfhttps://hdl.handle.net/10348/12885porPinto, Ana Rita Barreirainfo:eu-repo/semantics/embargoedAccessreponame:Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)instname:FCCN, serviços digitais da FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologiainstacron:RCAAP2025-05-04T02:02:34Zoai:repositorio.utad.pt:10348/12885Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireinfo@rcaap.ptopendoar:https://opendoar.ac.uk/repository/71602025-05-28T18:53:21.616168Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP) - FCCN, serviços digitais da FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologiafalse
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