Aplicação da biologia molecular no estudo da criptosporidiose neonatal bovina: diagnóstico molecular e epidemiológico

• Main Author: Lemos, Ana Suéli Braga
• Publication Date: 2019
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
• Download full: http://hdl.handle.net/10348/9108
• topic: criptosporidiose; Cryptosporidium; diagnóstico; qPCR; nested-PCR

A criptosporidiose é reconhecida como um problema de saúde pública. Os protozoários Cryptosporidium spp. são responsáveis por uma das mais importantes doenças gastrointestinais em crianças, indivíduos imunodeprimidos e animais no pré-desmame. A infeção por Cryptosporidium spp. é endémica nos bovinos por todo o mundo e é uma das mais importantes causas de enterite em vitelos, dando origem a um quadro de diarreia profusa, desidratação e, em casos mais graves, mesmo morte do animal. Mais de um século passou após a descoberta destes parasitas, que permanecem como agentes de difícil controlo na produção animal e no meio ambiente. As medidas terapêuticas disponíveis para o controlo da doença são de eficácia limitada, sendo que apenas reduzem a excreção do parasita, permanecendo a disseminação de oocistos infetantes. Com base em vários estudos, as vacinas surgem como um futuro terapêutico promissor, mas a sua eficácia requer estudos de campo para ser comprovada. Este trabalho teve como objetivos principais: (a) detetar e quantificar Cryptosporidium spp. em vitelos de seis explorações leiteiras, nas duas primeiras semanas de vida; (b) analisar indicadores de saúde de forma a comparar os sinais clínicos com a positividade ao agente. Teve ainda como objectivos secundários, avaliar a ação in vivo do alimento mineral Nova Calforce® na excreção de Cryptosporidium spp e inferir as práticas de maneio instituídas nas explorações que promovem a infeção. Foram incluídos neste estudo 101 animais com idades compreendidas entre os 7 e os 15 dias, tendo sido formados dois grupos em cada exploração, um grupo controlo e um grupo sujeito a tratamento. Para deteção e quantificação de Cryptosporidium spp., foram aplicadas as técnicas de nested-PCR e a técnica de PCR quantitativo em tempo real (qPCR) nas amostras fecais recolhidas. Inquéritos de exploração foram instituídos de forma a identificar os fatores de risco, permitindo promover possíveis alterações de maneio para a prevenção e controlo da doença. As prevalências obtidas nas diferentes explorações variaram entre 75 a 100%, com uma excreção média de 9,28 x 107 oocistos / g de fezes. Relativamente ao ensaio com Nova Calforce®, verificou-se em média, que os valores de oocistos excretados foram menores no grupo sujeito a tratamento, embora sem significância estatística (p=0,2847). A técnica de qPCR apresentou elevada sensibilidade para o diagnóstico de animais numa fase precoce de infeção antes do aparecimento de sinais clínicos e em casos de infeção subclínica com elevados níveis de excreção. Perante os resultados obtidos, torna-se importante a identificação de fatores de risco e dos animais que influenciam a resistência e perpetuam a doença na exploração, criando estratégias de maneio na exploração de forma a minimizar a disseminação dos agentes