Interleukin-15 and phytohaemagglutinin: a combination to study human CD8+T cell differentiation in vitro

• Main Author: Terra, Mariana Isabel da Cunha Monteiro
• Publication Date: 2012
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
• Download full: https://repositorio.cespu.pt/handle/20.500.11816/230; http://hdl.handle.net/20.500.11816/230
• topic: Células humanas T CD8+

Estudos prévios realizados no nosso laboratório avaliando a influência da IL-15 na expansão e diferenciação antigénio-independente de células humanas T CD8+, demonstraram que esta citocina é capaz de induzir a expressão de novo de recetores natural killer (NKR) em linfócitos T CD8+CD56- purificados, após 12 dias de cultura. Células T CD8+ NK-like induzidas pela IL-15 apresentavam um fenótipo regulatório (efetor/memória) e a expressão aumentada de NKR estava intrinsecamente relacionada com aquisição de CD56. O principal objetivo deste trabalho foi estabelecer condições de cultura ideais de modo a manter culturas de longo prazo de linfócitos T CD8+ e estudar caraterísticas fenotípicas destas células T CD8+ diferenciadas. Para esse fim, linfócitos T CD8+ foram isolados a partir de PBMC de dadores de sangue saudáveis por purificação magnética, e cultivados na presença contínua de IL-15 em combinação com estímulos via TCR através do mitogénio específico para células T, fitohemaglutinina (PHA). A expressão do marcador prototípico de NK, CD56, foi avaliada por citometria de fluxo semanalmente, em combinação com parâmetros de crescimento celular e sobrevivência. Através da combinação de IL-15 e PHA conseguimos manter em cultura linfócitos T CD8+ por longos períodos de tempo (até 90 dias). Durante este período, as células T CD8+ adquiriram morfologia grande e granular, e uma fração destas células, sobretudo blastos, expressaram o marcador prototípico de células NKT, CD56. Particularmente, o estabelecimento de culturas a longo prazo de células T CD8+ diferenciadas só foi possível quando a IL-15 foi combinada cada duas semanas com o estímulo da PHA. Estes resultados sugerem o estabelecimento de linfócitos T CD8+ altamente diferenciados em resultado da combinação de sinais TCR-dependentes e TCRindependentes.